细胞融汉拖实验原理.pptVIP

细 胞 融 合 实 验 原 理 实 验 操 作 在公鸡翼下静脉抽取2ml鸡血，加入盛有8ml的Alsever液中，使血液与Alsever液的的比例达1∶4，混匀后可在冰箱中存放一周； 取此储存鸡血0.2ml加入0.8ml的0.85％生理盐水，充分混匀，1500r/min离心5min，弃去上清，加入1ml的0.85％生理盐水，重复上述条件离心两次。最后弃去上清，加GKN液0.8ml，离心； 弃去上清，加入0.3ml的GKN溶液，制成细胞悬液；（也可以用血球计数板计数，用GKN液将其调整为106个/ml）； 实 验 操 作 取以上细胞悬液0.2ml放入1ml的EP管中，然后放入37℃水浴中预热，同时将50％PEG液一并预热20min； 20min后将0.2ml的50％PEG溶液逐滴沿离心管壁加入到0.2ml细胞悬液中，边加边摇匀，然后放入37℃水浴中保温20min； 20min后，加入GKN溶液1ml，静止于水浴中20min左右； 1500r/min离心5min，弃去上清，加GKN溶液再离心1次； 弃去上清，加入GKN液少许，混匀，取少量悬浮于载玻片上，加入詹纳斯绿染液，用牙签混匀，3min盖上盖玻片，观察细胞融合情况。 融 合 过 程 相关实验溶液的配制 Alsever溶液：葡萄糖2.05g，柠檬酸钠0.80g，NaCl 0.42g，溶于100ml双蒸水中。 GKN溶液：