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产顺,顺-粘康酸细胞工厂的构建与优化
1212 生 物 工 程 学 报 宋国田 等/产顺,顺-粘康酸细胞工厂的构建与优化
Chinese Journal of Biotechnology
/cjbcn September 25, 2016, 32(9): 1212−1223
DOI: 10.13345/j.cjb.150541 ©2016 Chin J Biotech, All rights reserved
工业生物技术
,-
1,2 2 2 2 1 2
宋国田 ，江小龙 ，陈五九 ，彭彦峰 ，路福平 ，王钦宏
1 300457
2 300308
, , , . ,-. , 2016, 32(9): 1212–1223.
Song GT, Jiang XL, Chen WJ, et al. Construction and optimization of microbial cell factories for producing cis, cis-muconic
acid. Chin J Biotech, 2016, 32(9): 1212–1223.
摘 要: 顺,顺-粘康酸是重要的平台化学品。目前，生物合成顺,顺-粘康酸还缺乏高性能菌株，已报道的主要
工程菌株不仅需要诱导表达，遗传不稳定，而且发酵培养基组分复杂，不利于大规模工业化生产。构建能利用
简单无机盐培养基、遗传稳定且不需要诱导表达的新型工程菌受到人们的关注。本研究在实验室前期构建的产
三脱氢莽草酸工程菌株WJ060 中，整合合成顺,顺-粘康酸的3 个外源基因 (aroZ 、aroY 、catA) ，并且利用3 个
不同强度的组成型启动子进行组合调控，成功构建了27 株顺,顺-粘康酸工程菌，得到的最优工程菌MA30 的产
量达到 1.7 g/L。为了进一步提高顺,顺-粘康酸工程菌的生产能力，利用基因组复制工程构建突变体库，结合高通
量筛选方法，经过两轮筛选，成功筛选到了顺,顺-粘康酸产量提高超过8%的大肠杆菌MA30-G2 。利用5 L 发酵
罐进行分批补料发酵，MA30-G2 的顺,顺-粘康酸产量达到了 11.5 g/L。本研究采用组合调控和高通量筛选相结合
的策略不仅促进了顺,顺-粘康酸的生物合成，同时也为其他生物基化学品的生物制造提供了重要参考。
: 顺,顺-粘康酸，组合调控，大肠杆菌，组成型启动子，基因组复制工程，高通量筛选
Received: December 21, 2015; Accepted: January 15, 2016
Supported by: Key Technology RD Program of Tianjin Municipal Science and Technology Commission (No. 14ZCZDSY00066),
Research Equipment Program of Chinese Academy of Sciences (No. YZ201153).
Corresponding author: Qinhong Wang. Tel/Fax: +86-22 E-mail: wang_qh@
宋国田 等/产顺,顺-粘康酸细胞工厂的构建与优化 1213
Construction and optimization of microbial cell factories for
producing cis, cis-muconic acid
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