实验三、食品中蜡样芽孢杆菌的检验.ppt

（5）在普通肉汤内生长迅速，肉汤混浊，常常有菌膜或壁环，振摇易乳化。 2．菌数测定 以无菌操作将检样25g或25 ml按菌落总数测定方式，用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10-1～10-5的稀释液。取各稀释液0.1ml，接种在选择培养基（甘露醇卵黄多黏菌素琼脂）平板上，用L形棒涂布于整个表面，置37℃培养12～20h后，选取菌落数在30个左右者进行计数。蜡样芽孢杆菌在此培养基上生成的菌落为红色（表示不发酵甘露醇）,环绕有白色至淡粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶）。 计数后，从中挑取5个这样的菌落作证实试验。根据试验证实为蜡样芽孢杆菌的菌落数，计算出该培养皿内的蜡样芽孢杆菌数，然后乘其稀释倍数即得每克或每毫升样品所含的蜡样芽孢杆菌数。 3．分离培养 将检样或其稀释液划线于上述选择性培养基平板上，置37℃培养12～20h，挑取可疑蜡样芽孢杆菌的菌落接种于肉汤和营养琼脂培养基上做纯培养，然后做证实试验。 4．证实试验 （1）形态观察 本菌应为G＋杆菌，宽度在1μm或1μm以上，芽孢呈卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。 （2）培养特性 本菌在肉汤中生长混浊，常有菌膜或壁环，振摇易乳化。琼脂平板上形成的菌落不透明，表面粗糙，似毛玻璃状或融蜡状且边缘不齐。 （3）生化特性 本菌有动力；产生卵磷脂酶和酪蛋白酶；过氧化氢酶试验阳性；溶血；不发酵甘露醇和木糖；能液化明胶和还原硝酸盐；在厌氧条件下能发酵葡萄糖。 (4)生化分型 根据蜡样芽孢杆菌对柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、V-P反应、明胶液化的试验，分成不同型别，见表1。 （4）与类似菌鉴别 本菌与其他类似菌的鉴别见表2。 5.结果报告 报告1g（mL）检样中所含蜡样芽孢杆菌数量[个/g(mL)]。 实验三、食品中蜡样芽孢杆菌的检验 三、实验方法与步骤 四、实验结果 五、思考题 1．如何区分蜡样芽孢杆菌和苏云金芽孢 杆菌？ 2．设计蜡样芽孢杆菌计数程序？ 蜡样芽胞杆菌中毒菌量： 106/克 105/克时，为危险食品 食物中腊样芽孢杆菌的来源： 肉及制品的带菌率为10-26％,乳及制品带菌率为23- 77％,食品中该菌的污染源主要是泥土、尘埃、空气，其 次是昆虫、苍蝇、不洁的用具等。如果食用前不加热或 加热不彻底，即可引起食物中毒。 蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)的检验 （一）蜡样芽胞杆菌生物学性状 1、形态和染色特性 该菌为革兰氏阳性的大杆菌，菌体两端较平整，芽胞呈椭圆形，位于菌体中央稍偏一端,多呈链状排列,无荚膜，有周鞭毛。 2、培养特性 （1）需氧菌，生长温度范围在10-45℃之间。最适 生长温度为28-35℃。 （2）在普通培养基上生长良好。本菌在普通琼脂平板上，生长的菌落呈乳白色，不透明，直径4-6mm,边缘不整齐，表面粗糙，呈毛玻璃状或白蜡状。 （3）在血液琼脂平板上形成浅灰色、不透明、似毛玻璃状的菌落。菌落周围初呈草绿色溶血,时间稍长即完全透明。 （4）蜡状芽胞杆菌在甘露醇卵黄多粘菌素琼脂(MYP) 上的菌落为粉红色(表示不发酵甘露醇)，周围有粉红色的晕（表示产生卵磷脂酶）。 3、生化性状： （1）葡萄糖发酵试验：接种于酚红葡萄糖肉汤中， 厌氧条件下35℃培养24h。培养基应由红色变 为黄色。 （2）硝酸盐还原试验：阳性（红色）。 （表明本菌在厌氧条件下分解葡萄糖产酸） （3） V-P试验：接种于改良V-P培养基中，35℃ 培养48 h。加V-P试剂及肌酸数粒，静止 1h，应为阳性反应（伊红色）。 （4）L-酪氨酸分解试验：接种于L-酪氨酸琼脂培 养基上，35℃培养48 h,阳性反应菌落周围培 养基应出现澄清透明区（表示产生酪蛋白 酶）。阴性时应继续培养72 h再观察。 （5）溶菌酶试验：用直径2mm接种环取纯菌悬液 一环,接种于溶菌酶肉汤中，35℃培养24h。 该菌在本培养基（含0.001％的溶菌酶）中能 生长。如出现阴性反应,应继续培养24 h。 4、致病性 蜡样芽胞杆菌引起食物中毒，除必须具有大量的细菌外，肠毒素也是重要的致病因素。 耐热性肠毒素：100℃30分钟不能被破坏，为引起呕吐 型中毒的致病因素,常在米饭中形成。 不耐热肠毒素：是引起腹泻型胃肠炎的病因，能在各种 食物中形成。 5、抵抗力 蜡样芽胞杆菌100 ℃ 20分钟即可被杀死；对酸碱不敏感，pH6-11对本菌基本上不受影响，pH5以下，生长可受到抑制。 （二）流行病学特点 1、