中药五类新药赤芍总苷制剂的临床前药学实验研究设计.docVIP

中药五类新药赤芍总苷制剂的临床前药学实验研究设计 组员： 【实验目的】 1．通过赤芍总苷提取纯化与质量控制方案的设计和研究，掌握大孔树脂用于苷类成分纯化的主要影响因素和工艺参数的方法，掌握中药五类新药原料的质量控制方法及技术要求。 2．通过设计并完成中药五类新药赤芍总苷制剂的临床药学实验研究，掌握中药新药研究程序和中药新药申报资料的技术要求。 3．熟悉我国中药新药的分类、申报资料要求以及新药审批的基本程序。 【实验概述】 赤芍为毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.或川赤芍Paeonia veitchii Lynch的干燥根。味苦，性微寒。归肝经。具清热凉血，散瘀止痛的功效。常用于温毒发斑，吐血衄血，目赤肿痛，肝郁胁痛，经闭痛经，癥瘕积聚，跌打损伤，痈肿疮疡等症。[1] 赤芍中的化学成分主要有苷类成分，有赤芍苷（约3.5%—8%），苯甲酰芍药苷，芍药内酯苷，苯甲酰羟基赤芍苷，羟基赤芍苷，赤芍苷元，胡萝卜苷等苷，另外含有鞣质（约12.6%）、蔗糖、棕榈酸等[参考中药鉴定书]。赤芍药材所含丰富的苷类成分总称为赤芍总苷（TGP）。按干燥品计算，含芍药苷不得少于40.0%性状 本品呈圆柱形，稍弯曲，长5～40cm,直径0.5～3cm。表面棕褐色，粗糙，有纵沟及皱纹，并有须根痕及横向凸起的皮孔，有的外皮易脱落。质硬而脆，易折断，断面粉白色或粉红色，皮部窄，木部放射状纹理明显，有的有裂隙。气微香，味微苦、酸涩。（1）本品横切面：木栓层为数列棕色细胞。皮层薄壁细胞切向延长。韧皮部较窄。形成层成环。木质部射线较宽，导管群作放射状排列，导管旁有木纤维。薄壁细胞含草酸钙簇晶，并含淀粉粒。 （2）取本品粉末0.5g，加乙醇10ml，振摇 5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇 2ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每 1ml含 2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各 4μl，分别点于同一硅胶Ｇ薄层板上，以氯仿－醋酸乙酯－甲醇－甲酸（40:5:10:0.2） 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。照高效液相色谱法（附录ⅥD）测定。 　　色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液（40：65）为流动相；检测波长为230nm。理论板数按芍药苷峰计算应不低于3000。 　　对照品溶液的制备精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥36小时的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。 　　供试品溶液的制备 取本品粗粉约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，浸泡4小时，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。 　　测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪，测定,即得。 　 本品含芍药苷不得少于 1.8％。 工艺路线拟定 2.工艺条件研究 2. 1提取条件的选择 2.1.1粉碎 考察饮片，粗粉，中粉三种规格对提取的影响。后续提取具体条件筛选后，在进行实验。 粉碎度 收膏率(%) 过滤速率(ml/min) 饮片 粗粉 中粉 结果：粉碎度为 时，收膏率高且过滤时间短，宜将赤芍粉碎为 。 2.1.2提取 2.1.2.1溶剂选择 生产中常用的溶媒主要有水和乙醇。赤芍总苷为萜苷类化合物，其水溶性及醇溶性均较好，可以采用水和乙醇作为溶剂。50％ 乙醇，70％乙醇，水在同等条件下提取，比较提取物中的芍药苷含量 溶剂 芍药苷含量 水 60%乙醇 70%乙醇 结果：采用水作溶媒，糊化淀粉粒较多，过滤困难。采用 %乙醇提取的赤芍中芍药苷的含量最高，并高于药典中药材芍药苷含量不得少于2．0％的规定。故不宜采用水作溶媒，选定以乙醇为溶媒提取。 2.1.2.2提取方法选择 用乙醇作溶媒的提取方法有冷浸法、渗漉法、超声提取法和回流法。关于芍药苷的提取工艺的研究近几年的报道较多[]，但文献报道多用不同浓度的乙醇或水 加热回流提取，邓一鸣等[]还采取了超声提取的方法，但考虑到大生产的实际情况，选择乙醇回流提取法。 2.1.2.3提取工艺条件筛选 考察提取溶剂乙醇浓度（A）、用量(B)、 提取时间(C)、 提取次数(D)对PAE含量（评价指标）的影响 ,每因素设计 3水平 ,因此采用四因素三水平表(L934)。 因素水平表 正交试验表及结果如下: 试验号 因素 PAE 含量 A B C D 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2