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RT-P是CR
RT-PCR;1、基因表达
2、PCR技术(Polymerase chain reaction)：即聚合酶链式反应。在模板、引物和四种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促反应，其特异性由两个人工合成的引物序列决定。
反应分三步：
A、变性：通过加热使DNA双螺旋的氢键断裂，形成单链DNA；
B、退火：将反应混合液冷却至某一温度，使引物与模板结合。
C、延伸：在DNA聚合酶和dNTPs及Mg2＋存在下，退火引物沿53’方向延伸。以上三步为一个循环，如此反复。
3、逆转录酶（reverse transcriptase）：是存在于RNA病毒体内的依赖RNA的DNA聚合酶。
;PCR的扩增效率：;RT－PCR中从细胞分离的RNA的质量至关重要，包括RNA的纯度和完整性。
最关键因素：尽量减少RNA酶的污染
内源性RNA酶
环境中
;5*First strand buffer 4
0.1M DTT 2
10mM dNTP 1
100uM Random primer 1
MMLV-Rtase 1
Total RNA 11 (0.5-2ug)
Total 20ul
25℃,10min; 37℃, 2h; 70℃, 15min 4℃;PCR条件的优化
模板
引物(0.2-1umol/L)
缓冲液(Tris-HCl 10mmol/L
KCl 50mmol/L
pH 8.3-9.3)
镁离子(0.5-5.0 mmol/L)
dNTP
耐热DNA聚合酶
温度循环参数
?;染料法;Taq man探针
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