《酶工程实验》教案.docVIP

徐 州 工 程 学 院 教 案 2013 年至 2014 年 第 1 学期 第 周 星期 课题名称（含教材章节）： 《酶工程实验》 实验一 产纤维素酶菌株筛选和产酶条件优化分析 教学目的和要求： 1、熟悉功能性菌株筛选方法 2、掌握纤维素降解菌株的筛选方法 3、掌握菌株产酶条件优化方法 教学重点： 酶工程研究开发的策略 教学难点： 产酶条件优化方法 教 学 内 容 （ 要 点 ） 1、产纤维素酶菌株的筛选分析 2、菌株产酶条件优化 徐 州 工 程 学 院 教 案 纸 一、实验目的1、熟悉功能性菌株筛选方法 2、掌握纤维素降解菌株的筛选方法 3、掌握菌株产酶条件优化方法 二、实验原理(一)、功能性菌株开发策略 1、应用微生物来开发酶的优点 (1)微生物生长繁殖快，生活周期短。因此，用微生物来生产酶产品，生产能力（发酵）几乎可以不受限制地扩大，能够满足迅速扩张的市场需求。 (2)微生物种类繁多，它们散布于整个地球的各个角落，而且在不同的环境下生存的微生物都有其完全不同的代谢方式，能分解利用不同的底物。 (3)为微生物酶品种的多样性提供了物质基础。 (4)当基因工程介入时，动植物细胞中存在地酶，几乎都能够利用微生物细胞获得。 因此，有计划和仔细地筛选微生物菌种，通常可以获得能够生产几乎任何一种酶的适当细胞。 2、微生物酶开发的一般程序 (一) 样品的采集 采样的目的、采样地点、采样方法及采样的数量。 (二) 菌种的分离 培养基的确定、培养条件的确定。 (三) 菌种的初筛 (1)用简单的定性反应进行初筛； (2)在最初分离阶段就给予特殊的培养基或培养条件，进而让目的菌株得以繁殖，尽可能地把只成为目的菌的菌株或只将其最适菌株的一株纯化分离。 (四) 菌种的复筛 初筛之后，还要进行复筛。复筛的目的是在初筛的基础上，筛选产酶量高、性能更符合生产要求的菌种。复筛。 酶活的测定方法的建立尤其重要。 (五) 对复筛获得菌株的要求 (1)不是致病菌； (2)菌株不易变易和退化； (3)不易感染噬菌体； (4)微生物产酶量高； (5)酶的性质符合应用的需要，而且最好是胞外酶； (6)产生的酶便于分离和提取，得率高； (7)微生物培养营养要求低。 (六) 最佳产酶条件的初步确定 (1)培养方式的确定； (2)最佳培养条件组合； (3)微生物产酶的特性(胞内酶、胞外酶)； (4)微生物酶收集的时间顺序； (七) 微生物产酶性能的进一步提高 (1)获得高产菌种的突变体； (2)利用代谢工程和代谢调节机理来提高微生物的酶产量； (3)运用遗传工程、基因工程的手段将原有菌株中的目的基因转移到另外一些对生产环境更适应性的微生物细胞之内，使其高效表达； (八) 微生物酶的提取方法 (1)酶的粗提； (2)酶的精制。 (九) 微生物产酶菌种的保藏 (1)斜面； (2