扬子鳄与密河鳄基因组dna的复性动力学和组织结构的研究＊.pdfVIP

遗传学报，15(6):436--441,1988 Acta Genstica Sinica 扬子鳄与密河鳄基因组DNA的复性动力学 和组织结构的研究＊ 莫鑫泉 王为先 史a仙。 （中国科学院发育生物学研究所，北京） 马连科 刘立泉 李建锁 北（ 京 动 物 园） 通过 DNA复性动力学的分析，测定了扬子鳄和密河鳄基因组的组织结构，两者的复性曲 线非常相象，高度重复DNA含量很少，而中度重复DNA序列各占基因组的30%左右。中 度重复序列部分能再分成三个组分，虽然每个组分的序列复杂性和拷贝数有差别，但每部分的 总复杂性是相似的。我们已测得扬子鳄基因组的单拷贝序列为3.68X109bp,基因组为5.65x 10bp；密河鳄基因组的单拷贝序列为3.67x109bp，基因组为5.24X109bp。根据基因组的组 织结构的分析，在分子水平上表明两种鳄鱼是亲缘关系十分相近的种。 关键词：DNA复性，基因组结构，庵，进化 真核生物基因组是由单拷贝序列 结（构基因部分）和重复序列组成。遗传学研究已经 证明基因是具种族特异性的；分子生物学研究表明，重复序列组分也有种族特异性L14,930 重复序列大致可分成高度重复和中度重复两类，其种类、碱基数和重复次数随物种而异。 在六十年代，Britten等61‘通过DNA复性动力学的研究，发现在生物进化过程中，重复 序列以一定的频率发生变化，而且彼此间有亲缘关系。迄今，有关基因组的组织结构的研 究工作已经在两栖类[41、爬行类X159哺乳类LI11、人-[91［以及植物Lia,L]等广泛开展。 生活在长江下游的扬子鳄是我国重点保护的珍稀动物，它与生活在北美洲的密西西 比鳄 （即密河鳄）是仅存的栖息于温带淡水的两种鳄类。它们的形态、比较解剖和生活习 性都很相近，分类学家把它们定为鳄目，题亚科，矍族。在凰族中，现今世界上只残留下来 两个种，即扬子鳄(Alligatorsinensis)和密河鳄 (Alligatormississippiensss),Cohen[0] 和我们的研究指出，两者的染色体数都是32。从我们对核型2]‘以及血清蛋白、血红蛋白和 乳酸脱氢酶的凝胶电泳分析来看31〔，都说明两者是亲缘关系十分相近的种，尤其是染色体 数相等。核型分析基本相同的情况出现在不同种的爬行动物中是罕见的。地理资料表明， 欧亚大陆本是相连的整体，到了第三纪地壳发生大变动时，两个大陆才被分隔开。经过了 几百万年的长期遗传隔离后，是否扬子鳄和密河鳄是由于同一共．同的祖先在不同的生态 环境下的趋异，还是不同的物种生活在相似的环境下的趋同呢？为此，本文进一步在 DNA水平上比较了两者基因组的组织结构。 本文于 1987年5月28日收到。 本研究是国家自然科学基金资助项目。此工作得到北京动物园李扬文主任的大力支持、发ft生物学研究所 张燕生同志协助采血，在此一并致谢。 ‘期 莫鑫泉等：扬子鳄与密河鳄基因组 DNA的复性动力学和组织结构的研究 437 材 料 和 方 法 一（）高分子通 DNA 的制备 除鳄鱼血进行冻融裂解外，主要参照B1in等”‘的 方法提取高分子量 DNA，牛 DNA购自Sigma公司，细菌DNA按Marmur法L131提 取。 二（）DNA 的修剪和鉴定 DNA溶于pH6.8,0.12M 的磷酸盐缓冲液中，经超 声仪 M（SESONIPREP150）处理成平均长度为400bp的片段，经琼脂糖电泳鉴定。 三（）经基磷灰石 为（BoehringerMannheim产品）柱的制备、洗脱、复性反应 参照Britten[71的方法，主要过程为：经超声处理后的DNA片段在 100℃解链 10分 钟，在60℃下进行复性反应至所需要的 Cot值，并在60℃的条件下进行径基磷灰石柱 层析。用0.12M和0.4M,pH6.8的磷酸缓冲液分别洗脱单链 DNA.部分和已复性的双 链 DNA部分，计算出已复性 DNA 的百分数，并对 Cot作图，得到 DNA 的复性动力 学