保健食品中免疫球蛋白IgG的测定-北京东西分析仪器有限公司.PDF

北京东西分析仪器有限公司 保健食品中免疫球蛋白IgG的测定 一、方法提要 7d 3d 牛初乳通常是指奶牛分娩后 特别是 内所分泌的乳汁。目前牛初乳作 为一种功能性食品的原料已经受到普遍关注，它的特殊性首先体现在其化学组成 及活性物质的含量上。牛初乳免疫球蛋白（Ig）总量约为 50~100 mg/mL，其中 80% 以上是IgG。免疫系统发育不健全的新生犊牛吸收的IgG以未消化的状态 直接通过肠壁进入血液而获得被动免疫，这种被动免疫可保护犊牛免受外来疾病 的侵袭。 根据高效亲和色谱的原理，在磷酸盐缓冲液条件下免疫球蛋白IgG与配基连 pH2.5 IgG 接，在 的盐酸甘氨酸条件下洗脱免疫球蛋白 。 二、试剂及标准溶液配制 2.1 2.1 22..11 试剂 2.1.1 0.05mol/L 磷酸盐缓冲液：称取8.955gNa HPO 用水溶解定容至250mL。 2 4 称取7.802gNaH PO 用水溶解定容至500 mL。取160 mLNa HPO 溶液和340 2 4 2 4 mLNaH PO 溶液混合，用水定容至1000 mL，经0.45μm 微孔滤膜过滤。 2 4 2.1.2 0.05mol/L 甘氨酸盐酸缓冲液：称取1.876g甘氨酸，用125mL 水溶解， 加入0.2 mol/LHCl 75 mL 用水定容至500mL，混匀，经0.45μm的微孔滤膜 过滤。 2.2 2.2 22..22 标准溶液配制 IgG标准储备液：称取IgG标准品0.0250g，用流动相A溶解并定容至25.0 mL，摇匀，浓度为1.0mg/mL。 IgG标准系列溶液：取IgG 标准储备液，用流动相A稀释成含IgG0.2，0.4， 0.6，0.8，1.0mg/mL 的标准系列。临用时配制。 三、仪器及工作条件 3.1 3.1 33..11 仪器 高效液相色谱仪，配紫外检测器（北京东西分析仪器有限公司）。 3.2 3.2 33..22 色谱条件 色谱柱：Pharmacia HI-TrapProtein G 柱，1mL。 北京东西分析仪器有限公司 流动相A：pH6.5，0.05mol/L 磷酸盐缓冲液。 流动相B：pH2.5，0.05mol/L 甘氨酸盐酸缓冲液。 波长：280nm。 流速：0.4mL/min 进样量：20 μL。 梯度洗脱表 时间 流速/(mL/min) A/(%) B/(%) 0 0.4 100 0 4.5 0.4 100 0 5.5 0.4 0 100 18.0 0.4 0 100 18.5 0.4 100 0 25.0 0.4 100 0 四、分析步骤及分析结果 4.1 4.1 44..11 试样及色谱柱处理 称取 0.1 g（精确至 0.001 g）试样，用流动相A稀释至25.0mL