2009电针对脑缺血再灌注大鼠水通道蛋白-4的调节作用(神经接功能缺损程度、AQP4蛋白和mRNA在).pdfVIP

·12· 光明中医2009年1月第24卷第1期CJGMCM 2009．Vol24．1 January 【实验研究】 电针对脑缺血再灌注大鼠水通道蛋白．4的调节作用 彭拥军1 程介士2 吴根诚2 郭景春2 周飞2 杨永清3 1．江苏省中医院(南京210029)2．复旦大学上海医学院神经生物学国家重点实验室、 针刺原理研究所(上海200032)3．上海中医药大学(201203) 用神经功能缺损评分、免疫组化、western 结果：MCAO12 组能够明显减轻大鼠神经功能缺损程度，降低AQP4蛋白和mRNA的表达。结论：电针可减轻脑缺血后脑水肿导致的神经功能缺损 程度，促进神经功能恢复。电针的这种保护作用可能与AQP4表达下调有一定的关系。 关键词：电针；脑缺血；水通道蛋白-4；脑水肿 文章编号：1003．8914(2009)．01．0012．04 doi：lO．3969／j．issn．1003．8914．2009．01．006 缺血性脑血管病以其高发病率、高致残率和高死 缺血1小时后，将尼龙线退至颈外动脉处，即为再灌注 亡率而严重危害着人们的身心健康。脑水肿是缺血性 开始。电针组治疗采用上海医疗电子仪器有限公司制 脑血管病基本病理变化之一，也是导致病情加重、恶 化。甚至死亡的常见原因。电针能够有效减轻脑水肿， 中、百会，0．8—1．0mA，采用疏密波，疏波频率3．85I-Iz， 促进神经功能恢复n’2】。近年来的研究发现，水通道蛋 钟。分模型组、正常对照组，不针刺。 白-4(AQP4)与脑水肿的发生有着密切关系b1。电针减 轻脑水肿的作用是否与AQP4的表达变化有关呢?本1．2．2脑标本灌注固定和组织切片制备分再灌注 实验用大脑中动脉栓塞(MCAO)模型，探讨电针、AQP4 和脑水肿之间的内在联系，以期对指导临床治疗脑水 聚甲醛，断头取脑，20％和30％的蔗糖后固定。冷冻 肿提供新的思路。 切片机制备30／生m的脑冠状切片，置原位杂交保护液 1材料和方法 中一20℃保存。 1．2．3大鼠新鲜脑组织取材及组织总蛋白提取分 1，1实验动物健康雄性SD大鼠，体重215--2309， 由中科院上海实验动物中心提供。随机分为MCAO模 型组、缺血后电针处理组和正常对照组，每组再细分5 出右侧纹状体，加入蛋白裂解液及蛋白酶抑制剂，冰浴 手工及超声匀浆后高速离心，取上清液于100。C煮沸 个亚组，分别于再灌注6h、12h、24h、48h和72h处死， 每个时间点4—6只大鼠。 3—5分钟，Bradford法测定蛋白质含量。 1．2实验方法 1．2．4大鼠新鲜脑组织取材及总RNA提取分再灌 1．2．1建立MCAO模型采用LongaHl建立的方法并 侧纹状体，迅速置于液氮灌中保存。纹状体总RNA 有所改良。术前禁食8小时，10％水合氯醛(0．36ml／ 1009)腹腔注射麻醉，选取颈正中切口，分离并用微动提取按照Invitrogen公司的TRIZOLReagent的说明方 脉夹夹闭右颈外动脉、颈总动脉、颈内动脉和翼腭突动 法进行提取。 1．3．检测方法 脉。在右颈外动脉剪一小口，将直径0．18mm的410尼 龙线由颈外动脉切口插入颈内动脉，再送入颅内大脑 1．3．1神经功能缺损评分评定观察大鼠术后反应， 中动脉起始部，有阻力感并且脑血流下降至基础值的 于再灌注24h时实行单盲的神经功能缺损评