杨浦五角场新王牌补习班分解纤维素的微生物的分离.docxVIP

第4课时　分解纤维素的微生物的分离[目标导读]　1.掌握纤维素酶的种类和作用及纤维素分解菌的筛选方法。2.理解并掌握纤维素分解菌的筛选过程及刚果红染色法的原理。3.掌握纤维素酶的测定方法。[重难点击]　1.简述纤维素酶的种类及作用。2.掌握从土壤中分离某种特定微生物的操作技术。3.分析分离分解纤维素的微生物的实验流程，弄懂实验操作的原理。一　纤维素分解菌的筛选的原理1.纤维素与纤维素酶(1)纤维素据图，纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖类物质。棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维素酶。(2)纤维素酶①组成：一种复合酶，它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。②作用(3)实验验证试管滤纸条缓冲溶液纤维素酶(70～80U/mL)条件结果11×6cmpH＝4.8的0.1mol/L醋酸—醋酸钠缓冲溶液10mL1mL两试管固定在50mL锥形瓶中，在摇床上以140r/min的转速振荡反应1h时间足够长，滤纸被完全分解21×6cmpH＝4.8的0.1mol/L醋酸—醋酸钠缓冲溶液11mL基本无变化①1个酶活力单位是指在温度为25℃，其他反应条件最适宜情况下，在1min内转化1_mmol的底物所需要的酶量。②实验是如何构成对照的？答案　在一支试管中添加纤维素酶，另一支试管不添加纤维素酶；尽管醋酸—醋酸钠缓冲液用量不同，但都能维持相同的pH。2.纤维素分解菌的筛选(1)方法：刚果红染色法。常用的有两种方法，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应；另一种是在倒平板时就加入刚果红。(2)原理：刚果红＋纤维素→红色复合物纤维素被分解，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。归纳提炼两种刚果红染色法的比较　项目内容　方法一方法二过程培养基上长出菌落→覆盖质量浓度为1mg/mL的CR溶液倒去CR溶液→加入NaCl溶液倒掉NaCl溶液→出现透明圈配制CR溶液→灭菌→按照1mLCR/200mL培养基比例混匀→倒平板→培养→出现透明圈优点显示出颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用操作简便，不存在菌落混杂问题缺点制作繁琐，加入刚果红会使菌落之间发生混杂①由于琼脂、土豆汁中均含有淀粉类物质，可能使产生淀粉酶的微生物也形成透明圈，即假阳性反应；②有些微生物具有降解色素的能力，它们会降解刚果红形成透明圈，与纤维素分解菌不易区分1.微生物体内能够使纤维素分解成纤维二糖的酶是(　　)A.C1酶和CX酶B.C1酶和葡萄糖苷酶C.CX酶和葡萄糖苷酶D.C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶[问题导析]　纤维素是在C1酶和CX酶的作用下被分解为纤维二糖，葡萄糖苷酶可以将纤维二糖分解为葡萄糖。解析　纤维素酶属于复合酶，至少包含C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶三种组分。其中C1酶和CX酶使纤维素分解成纤维二糖。2.鉴定纤维素分解菌时，可以使用刚果红对其染色，刚果红染色法有两种常用方法，两种刚果红染色法的结果是(　　)A.均会出现透明圈B.方法一出现，方法二不出现C.均不会出现透明圈D.方法一不出现，方法二出现[问题导析]　刚果红可以跟纤维素结合形成红色复合物，加入纤维素酶后纤维素被分解，不能形成红色复合物，从而出现透明圈。两种方法都能使纤维素分解，都能形成透明圈。解析　两种刚果红染色法染色的时间不同，但结果一样，均出现透明圈。二　实验设计与操作提示结合实验原理和教材给出的资料，完成下面的实验方案流程图。1.实验过程分析：选择富含纤维素的环境，如树林中多年形成的腐殖土↓↓↓：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上↓：刚果红染色法，挑选产生透明圈的菌落↓2.两种培养基纤维素分解菌的选择培养基配方1纤维素粉5gNaNO31gNa2HPO4·7H2O1.2gKH2PO40.9gMgSO4·7H2O0.5gKCl0.5g酵母膏0.5g水解酪素0.5g将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL鉴别纤维素分解菌的培养基配方2CMC－Na5～10g酵母膏1gKH2PO40.25g琼脂15g土豆汁100mL将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL(1)从功能上来看，培养基配方1为纤维素分解菌的选择培养基，该培养基中的唯一碳源是纤维素粉，只有能利用它的纤维素分解菌才能生存；培养基配方2为纤维素分解菌的鉴别培养基。在该培养基中加入刚果红溶液，当培养基中长出菌落后，由于在该培养基上生长的只能是纤维素分解菌，能分泌纤维素酶，因此菌落周围会形成透明圈。(2)从物理性质上来看，培养基配方1为纤维素分解菌的液体培养基，利用这种培养基可以增加纤维素分解菌的浓度；培养基配方2为纤维素分解菌的固体培养基，原因是添加了琼脂成分，需要在培养基上形成我们肉眼可见的菌落。(3)若设置一