基因工拟程11-大肠杆菌基因工程.pptVIP

第十三章 大肠杆菌基因工程 D 基因工程菌的遗传不稳定性及其对策 A 大肠杆菌作为表达外源基因受体菌的特征 B 外源基因在大肠杆菌中高效表达的原理 C 大肠杆菌基因工程菌的构建策略 D 基因工程菌的遗传不稳定性及其对策 E 利用重组大肠杆菌生产人胰岛素 融合型目的蛋白表达系统的构建 用于融合蛋白构建的受体蛋白： 谷胱甘肽转移酶（GST） 维持良好空间构象 硫氧化还原蛋白（TrxA） 维持良好空间构象 pTrxFus 麦芽糖结合蛋白（MBP） 促进分泌 金黄色葡萄球菌蛋白A（SAPA） 免疫亲和层析 pRIT2T 外膜蛋白（OmpF） 促进分泌 b-半乳糖苷酶（LacZ） 免疫亲和层析 泛素蛋白（Ubi） 维持良好空间构象 目的蛋白的回收 受体蛋白部分的存在可能会影响目的蛋白的空间构象和生物活性；如果注入人体还会导致免疫反应。因此在生产药用目的蛋白时，将融合蛋白中的受体蛋白部分完整除去是必不可少的工序。融合蛋白的位点专一性断裂方法有两种： 化学断裂法 酶促裂解法 目的蛋白的回收 用于蛋白位点专一性化学断裂的最佳试剂为溴化氰（CNBr）它与多肽链中的甲硫氨酸残基侧链的硫醚基反应，生成溴化亚氨内酯，后者不稳