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实验一 含质粒的大肠似杆菌的接种、培养与菌种保藏
实验一 含质粒的大肠杆菌的接种、培养与菌种保藏 一、实验目的 了解培养基的配制原理，掌握配制培养基的一般方法和步骤； 了解常见灭菌、清毒基本原理及方法，掌握高压蒸汽灭菌的操作方法； 了解菌种保藏的基本原理，掌握菌种保藏方法和无菌操作技术。 二、实验原理 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因子和水。LB培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。 高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。 微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究的基本操作技能，分为斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种等。 三、实验材料 大肠杆菌DH5α 含pET32质粒的大肠杆菌DH5α 含pET32-CaM5质粒的大肠杆菌DH5α 四、试剂 酵母浸膏 、蛋白胨、NaCl 五、实验步骤 1. 配制LB液体培养基 称取胰蛋白胨0. 5 g，酵母提取物0.25 g，NaCl 0. 5 g于100 ml的烧杯中，加入50ml蒸馏水搅拌溶解，然后分装到3个三角瓶中，每瓶15ml，用双层锡纸包扎好。 2. 培养基的灭菌与消毒 高温高压灭菌配好的培养基(121 ℃，20min)，备用。 3.接种和培养 灭菌完成后，当培养基温度降至55-60℃时，每瓶加入15μl氨苄青霉素母液(终浓度为100 μg/ml )，摇匀后，分别接种三种菌种，贴上标签；置于摇床中37 ℃振荡培养过夜。 六、实验结果的观察 第二天取出培养物，观察不同菌种生长情况，并记录。 七、菌种的保藏（示范） 短期保藏、长期保藏 八、实验报告要求： 1、实验结果：图片需要标注自己的样品的位置，并对结果进行分析； 2、每个实验后的思考题必须认真完成。 考核方式：1）平时50% + 综合50% 2）缺席1次，总评降1等次，每次5分 * *
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