比色法测定贯叶连翘总黄酮含量-第二军医大学药物分析精品课程.docVIP

比色法测定贯叶金丝桃总黄酮含量 第二军医大学 杨光 杜晓义 王涛 曾伟 摘要：目的：。方法：结果：本方法操作简单、准确、重现性好，可用于测定贯叶金丝桃中总黄酮的含量。 关键词：贯叶金丝桃 总黄酮 三氯化铝 比色法 含量测定 贯叶金丝桃为藤黄科植物贯叶金丝桃(Hypericum perforatum L.)的干燥地上部分，又名贯叶，圣约翰草（St. John’s wort）具有清心明目、调经活血、止血生肌、解毒消炎的功效[1]。现代药理研究表明：贯叶金丝桃具有抗抑郁、抗炎阵痛等作用[2][3][4]。因此本实验以芦丁为对照品，建立了AlCl3比色法测定贯叶金丝桃中的总黄酮含量[5]，并对该方法进行了方法学考察。实验证明本法用量少、操作简便、结果可靠、重现性好，可用于贯叶金丝桃中总黄酮含量的测定。 1 仪器与试药 UV-2450紫外-可见分光光度计（日本岛津），SK5200LH超声仪（上海科导超声仪器有限公司），电子天平。 贯叶金丝桃提取物（实验室自制，批；芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100080-200707）；所用试剂均为分析纯。 2 实验原理与方法 2.1 实验原理 贯叶金丝桃中含有芦丁、槲皮素等多种黄酮类化合物，其黄酮母核所含的游离羟基能与铝离子在一定条件下形成络合物，经显色后吸收波长红移，在可见光范围有较强吸收。本实验选择AlCl3为显色剂，芦丁对照品与供试品均在405-410nm范围内有最大吸收。经实验确定，选择406nm与409nm两个波长处测定贯叶金丝桃中总黄酮的含量。 2.2 溶液的配制 2.2.1 芦丁对照品的制备 取芦丁对照品0.204g，精密称定，置于100ml棕色量瓶中，加入60ml 80%乙醇溶解80%乙醇定容，密封保存，作为对照品溶液。 2.2.2 贯叶金丝桃提取物供试品的制备 取贯叶金丝桃有效部位0.10g，精密称定，置于50ml量瓶中，加入20ml 80%乙醇，超声20min使溶解，冷却至室温后，用80%乙醇定容，过滤，弃去2ml初滤液，收集约40ml续滤液于50ml量瓶中，避光密封保存，作为供试品溶液。 2.2.3 显色剂与空白对照溶液的配制 取AlCl3.6H2O 2.4300g，精密称定，置于100ml量瓶中，加入蒸馏水摇匀使溶解，定容，配制成浓度为0.101mol/L的显色剂溶液。分别精密量取0.5、1.0、1.5ml该溶液于25ml量瓶，80%乙醇定容，作为空白对照液。 2.3因素考察 2.3.1 显色时间考察 精密量取2.2.1”项下芦丁对照品溶液于25ml量瓶，分别加入2.2.3”项下三氯化铝溶液1.00ml，80%乙醇定容，摇匀，分别静置20、30、40min后，300-700nm波长范围内进行扫描。20min、30min、40min后均于406nm出现，吸光度0.275、0.276和0.278，说明显色对吸光度无显著影响，，显色时间为20min 图1 不同显色时间对应吸光度值变化曲线图 2.3.2 显色剂浓度考察 精密量取2.2.1”项下芦丁对照品溶液1.30m于25ml量瓶，分别加入2.2.3”项下三氯化铝溶液0.501.00ml、1.ml，用80%乙醇定容，静置20min300-700nm波长范围内扫描吸收曲线。0.50ml显色剂反应后于405.5处出现吸收峰，吸光度0.279；1.00ml显色剂反应后于406nm处出现吸收峰，吸光度0.275；1.50ml显色剂反应后于408nm出现吸收峰，吸光度0.278。显色剂，吸影响显色剂的加入量为1.00ml。 2.3.3 线性预实验和显色波长的确定 精密量取2.2.1”项下芦丁对照品溶液1.30ml1.90ml，2.50ml，置于25ml量瓶，分别加入2.2.3”项下三氯化铝溶液1.0ml，80%乙醇定容，静置20min于380-500nm扫描吸收曲线 再精密量取2.2.2”项下供试品溶液1.00，1.30，1.50ml于25ml量瓶，分别加入2.2.3”项下三氯化铝溶液1.0ml，80%乙醇定容，静置20min于380-500nm扫描吸收曲线供试品与对照品吸收峰略有不同中，供试品峰出现在409nm左右，对照品峰出现在406左右。作图，得到以下浓度-吸光度图样品 浓度ug/ml） 吸光度（406nm） 吸光度（409nm） 供试品（有效部位）82.960 107.850 124.440 0.319 0.417 0.470 0.320 0.418 0.471 表2 不同浓度供试品溶液在406nm和409nm处吸光度结果 样品 浓度ug/ml） 吸光度（406nm） 吸光度（409nm） 对照品10.608 15.504 20.400 0.275 0.406 0.538 0.275 0.