质粒在大肠杆菌和链霉菌和FR-008之间接的属间接合转移①.pdfVIP

遗传 HEREDITAS(Beijing)16(6):7-101994 质粒在大肠杆菌和链霉菌)FR-008之间的属间接合转移① 邓子新 周秀芬 华（中农业大学微生物科学与技术系，武汉430070) 摘 要 tIJ8154是由链枪菌一大肠杆菌双功能穿梭载体pGM160衍生而来的．本文报道这个质粒从携带 RP4的大肠杆菌细胞中向革兰氏阳性细菌一链霉菌FR-008中的转移．从两种宿主中分别提取质粒 DNA，进行琼脂糖凝胶电泳，发现pIJ8154的结构在两种亲缘关系甚远的宿主中均是稳定的，这种接合 转移的方法已经成为向链霉菌FR-008中转移基因的一种手段． 关键词 接合转移，质粒，链霉菌 IntergenericPlasmidConjugalTransferBetween EscherichiacoliandStreptomycesFR-008 DengZixin ZhouXiufen (DepartmentofMicrobialSciencesandTechnology,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070) 长期以来，人们一直认为微生物质粒之间的接合转移只限于亲缘关系极其相近的两个种或属之间．最近， Trien-Cuot等人首次阐明一个G一大肠杆菌与许多G十细菌的穿梭质粒之间也可以进行质粒的接合转移 ”（，．为 了使这种转移成功，质粒必须既具备大肠杆菌．又具备G＋细菌的复制起始点o（ri)，转移还依赖于转移起始点 (oriT）的顺式作用和IncP群质粒如RP4转移基因I（ra）的反式作用．自此以后，许多研究者都构建了类似的穿梭 质粒，证明这种转移可以发生在亲缘关系遥远的生物，如大肠杆菌与肠球菌、链球菌、苏云金杆菌、利斯特氏 菌、葡萄球菌 川‘、链霉菌 ，（，与棒杆菌 的〔之间．最引人注目的还是将农杆菌质粒诱动到烟草植物细胞中以及 穿梭质粒从大肠杆菌转移到啤酒酵母中(3（,5)．甚至有人阐明大肠杆菌的天然质粒RSF1010也可以通过接合而转 移到链霉菌和分枝菌中并稳定遗传(4)．这里，我们以产生烯类抗生素的链霉菌FR-008（〕‘为宿主，尝试了将大 肠杆菌一链霉菌双功能质粒pIJ8154诱动转移到FR-008的方法，并阐述了这种技术的可行性和实用性． 1材 料 和 方 法 1.1菌株、质粒和培养条件 本研究所用到的菌株和质粒列于表 1．大肠杆菌的液体培养基为LB，培养温度为37D,FR-008的液体培养 基为YEME或TSB(Z)，固体培养基为R2YE,30℃培养．收获抱子的方法见文献[2［l．在液体培养基中，链霉素 (Sigma）和氨节青霉素(Bachetn）的使用浓度分别为30ug/ml和 100ug/ml. 诱动性质粒pPM927的‘限制性酶谱见文献[9].pIJ8154的酶谱见图1，它是由pGM160(6)所衍生的，它与 pGM160唯一差别是庆大霉素抗性基因a（acC1)所处的XbaI-HindII片段(1（.4kb)被携带RK2转移起始点o（riT)的 Xbal-HindIII片段(0（.7kb)所取代． ①本项研究受到国家科委863青年科学基金和国家自然科学基金资助． 8 遗 传 HEREDITAS(Beijing)1994 16卷 表 I 菌 株 和 质 粒 菌株 或 质粒 大 小k（b) 遗 传 标 记一起 源 资 料 来 源 大肠杆菌ET12567 dam-13::Tn9(cat),dcm-6 T.Kieser私（人交流） 大肠杆菌ET12567(RP4) 同ET12567，但携带RP4(sir) M.Bibb私（人交流） 链霉菌FR-008