人的克隆、高可溶性融合表达及活性分析.PDFVIP

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人的克隆、高可溶性融合表达及活性分析

卷 期 生 物 工 程 学 报 !! %’ (!! ) ( 年 月 !##$ !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 *+,-+./ !##$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 人!#$% ’(% 的克隆、高可溶性融合表达及活性分析 #)*+,+- ,.*)/0)1 23451!!,*+ 6+7 #8656915,:69,*+ *; /=6+ !#$% 管政兵,曹 鹏,叶记林,张双全 , , PQ=) R@1,DJS3,D G=T U1,D VK *3JW3, +,5 RX=)P 6@-+,DJY-+, 南京师范大学生命科学学院,江苏省分子医学生物技术重点实验室,南京 !##;H , , , , ’#+$1) 3*(4#$0% 5%2 6+7(*+/(*2 - (* 8(,%0),+* +$9 8%9#0+, .#(/%0$(,(12 6#- % :0#%$0% !(,,%1% ;+$ #$1 ;(*=+, $#4%*#/2 ;+$ #$1 !##;H !#$+ 摘 要 SGZ= 是除?=G[ 外S=FF 和=U0[W 共用的另一细胞表面受体。为了研究ASGZ= 作为拮抗受体的可能及获得活性 蛋白用做结构功能研究,我们以 法从人 系非洲淋巴瘤细胞株 总 中扩增出人 的全长 ,经 ASGZ= 0?JUG0 S 0+\3 0)= SGZ= 2])= 克隆测序证实所克隆的基因为人 。继而通过嵌套 扩增出胞外可溶区( , 个氨基酸组成,含有一个 个半胱 SGZ= UG0 ASGZ= ^$ $ 氨酸的保守 ,构成 个二硫键) ,构建原核表达载体 ( ) ,在大肠杆菌菌株 ( ) 中 G0] 2])= 7K?^ O + _ JASGZ= T.3D+93 S ]K 7W/A6 高可溶性融合表达出重组蛋白ASGZ=J)-A=JX3A ,同时克隆表达了融合蛋白)-A=JX3A 。经)3 _ J)?= 亲和纯化后的目的蛋白进 $ $ 行细胞学实验表明 能特异阻断 促小鼠 细胞的增殖作用,而 则不能,证实我们所表达得到的受体胞外 ASGZ= S=FF S )-A=JX3A

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