DNA修饰电极的研究-Core.PDF

　　　　　　　中　国　科　学(B　辑)　　　　　　　 第29 卷　第4期 SCIENCE IN CHINA (Series B)　 1999 年8月 DNA 修饰电极的研究＊ ———Ⅶ .共价键合和吸附DNA-SAM/Au 修饰电极的制备及表征 ＊＊ 陆　琪　庞代文 　胡　深　程介克 (武汉 学化学学院, 武汉430072) 蔡雄伟　施财辉　毛秉伟　戴鸿平 (厦门 学固体表面物理化学国家重点实验室, 厦门361005) 摘要　　采用先通过2,2′-二硫二乙醇自组装得到自组装单分子层(SAM), 再在SAM 上共价键合和吸附固定DNA 的方法制备了两类DNA 修饰电极,并对得到的DNA 修 饰电极进行了电化学和谱学表征.结果表明该方法是可行的,也是较为理想的在电 极表面固定DNA 的方法. 关键词　　DNA　修饰电极　自组装　制备　表征 DNA 修饰电极由于在基因传感器、分子识别以及研究DNA 与其他分子的相互作用等方面 有重要的科学意义和实用价值, 因而正受到广泛关注[1～5] .DNA 在电极表面的固定是DNA 修 饰电极研究的基础.目前通过巯基(—SH)在Au表面自组装制备DNA 修饰电极的方法被广泛 [3,5] 采用 .该方法是先将要固定的DNA 片断的一端修饰上—SH, 再通过—SH 在Au 表面的自 组装作用得到DNA 修饰电极.但该修饰方法存在着一些问题, 诸如—SH修饰的DNA 难以合 成,且需要分离提纯, 操作繁琐, 所以十分昂贵;巯基化合物结合 DNA 后,其体积 幅度增加, 因此在Au 表面自组装比较困难.考虑到上述存在的问题, 我们采用先进行—SH化合物自组 装,得到自组装单分子层(SAM),再在SAM 上共价键合或吸附固定DNA 的方法制备DNA 修饰 电极,并对得到的DNA 修饰电极进行了电化学和谱学表征. 1 　材料与方法 1.1 　试剂 小牛胸腺 DNA (华美生物制品公司)按文献[6] 纯化至 OD /OD 值 于 1.8. 260 280 Co(phen)Cl ·8H O 按文献[7]的方法合成.2,2′-二硫二乙醇(DTDE,Fluka), 1-乙基-3-(3-二甲 3 2 2 氨丙基)碳二亚胺(EDAC, Sig a),2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES, Serva), 及其余所用试剂均为分 析纯.实验用水为无菌二次蒸馏水. 　　　1998-10-12收稿, 1999-01-13 收修改稿 　　＊国家自然科学基金(批准号39770220、厦门 学固体表面物理化学国家重点实验室基金和湖北 　　　省自然科学基金(批准号:96J037)资助项目 　 ＊＊联系人 3　　42 中　　国　　科　　学　　(B　辑) 第29卷 1.2 　dsDNA 修饰电极的制备 1.2.1 　金电极的预处理　　金在沸腾的浓硝酸中浸煮5 in,取出后用水反复冲洗,在1 ol/L H SO 中进行循环伏安扫描,扫描上下限分别是+1.5, +0.2 V,至得到稳定的循环伏安曲线. 2 4 2 电极的真实面积根据表面氧化物还原峰的电量求得,为 1.20 c .经电化学处理和表征后的 金电极,分别用水和丙酮超声清洗5 in,冲洗后立即放入含有40μol/L 的DTDE 水溶液中, 浸泡4 h,得到DTDE修饰金电极(SAM/Au),冲洗备用. 1.2.2 　共价固定的dsDNA 修饰电极的制备　　将SAM/Au 转入含有1 g/ L 活化剂EDAC 和0.5 g/ L双链DNA(dsDNA)的0.04 ol/LMES-NaOH 缓冲溶液(pH6.0)中,室温下反应24