In Situ PLA技术原位分析MTA1及NuRD复合体其他组分的相互作用.pdf

《癌症进展》2014 年7 月第12 卷第4 期 *论 著* 394 ONCOLOGYPROGRESS, July 2014, Vol. 12, No. 4 InIn SituSitu PLAPLA 技术原位分析技术原位分析MTAMTA11 与与NuRDNuRD 复合体复合体 其他组分的相互作用其他组分的相互作用△△ 1 2 3 2 2 1 2 2 刘健 王海娟 刘群 李春晓 刘欢 黄骁舾 孟希亭 赵枚 2 2# 2# 林晨 黄常志 钱海利 1 首都医科大学附属北京朝阳医院医学研究中心，北京 100020 2 中国医学科学院北京协和医学院肿瘤医院肿瘤研究所分子肿瘤学国家重点实验室，北京100021 3 首都医科大学附属北京妇产医院妇科肿瘤，北京100006 摘要摘要：：目的目的 原位检测肿瘤转移相关蛋白MTA1 与NuRD 复合体其他组分-Mi2 、HDAC2 及MBD3 的相互 作用并分析MTA1/NuRD 复合体在HCT116 细胞中的分布情况。方法方法 首先利用co-IP 技术体外验证MTA1 与 NuRD 复合体其他组分Mi2 、HDAC2 及MBD3 在HCT116 细胞裂解液中的相互作用。然后利用In Situ PLA 技 术，体内原位检测MTA1 与三者的相互作用，并根据镜下阳性荧光信号数目，比较MTA1 与Mi2 、HDAC2 及 MBD3 之间的作用强弱；根据相互作用位点的亚细胞分布情况，分析间期及M 期MTA1/NuRD 复合体的核质 分布情况。结果结果 首次从体内原位水平证实MTA1 与NuRD 复合体其他组分-Mi2 、HDAC2 及MBD3 的相互作 用；其作用强度HDAC2 最高，Mi2 次之，MBD3 最弱；首次发现MTA1/NuRD 复合体存在很明显的胞质分布（约 占总量的1/4 ）；另外，我们还首次发现在M 期MTA1/NuRD 复合体不再位于核区，而是位于染色体外周。结论结论 In Situ PLA 技术是一项有效的原位检测蛋白相互作用的新技术；MTA1/NuRD 复合体可能参与MTA1 胞质中 功能的发挥；并且其胞质分布可能参与M 期进程调控。 关键词关键词：：MTA1 ；NuRD 复合体；相互作用；In Situ PLA 技术 中图分类号中图分类号：：RR7373 文献标志码文献标志码：：AA doi:doi: 10.11877/j.issn.1672-1535.2014.12.04.17 InIn situsitu analysisanalysis ofof thethe interactionsinteractions ofof MTAMTA11 withwith NuRDNuRD complexcomplex componentscomponents byby InIn SituSitu PLAPLA technologytechnology△△ LIU Jian1 WANG Hai-juan2 LIU Qun3 LI C