基因工程药物的质量控制.pdfVIP

浅议基因工程药物的质量控制 国药集团长春生物制品研究所有限公司 长春金赛药业有限公司 哈药集团 生物工程有限公司 生命科学正成为21世纪的领头科学。生物药物毒性低、副作用 小、容易为人体吸收，因此在药品中比例趋增。自1982年全世界第 一个基因重组新药“人胰岛素”在美国上市以来，美国现已有近百 种基因工程重组生物技术药物获FDA 批准上市；自1989年我国批准 了第一个在我国生产的基因工程药物重组人干扰素α1b，现已正式 批准上市的达20 种。《中国药典》（2000年版）首次载入了基因工程 产品。 目前，基因工程药物主要有重组蛋白质或多肽类、抗体和疫苗 3 大类。此类药物的出现和发展，给药物分析带来了新的挑战，由于 其可能含有用传统生产方法不可能存在的有害物质，所以这类产品 的质量控制与传统方法生产的产品有本质的差别。鉴于这类产品生 产工艺的特殊性，除需要鉴定最终产品外，还需从基因的来源及确 证、菌种的鉴定、原始细胞库等方面提出质量控制的要求，对培养、 纯化等每个生产环节严格控制，才能保证最终产品的有效性、安全 性和一致性。由于产品有其固定的易变性，质量控制尚无非常成熟 的经验和方法，本文在此就有关问题作一简述。 1 质量控制要点 1.1 原材料 主要是对目的基因、表达载体及宿主细胞（如细菌、酵母、哺 乳细胞和昆虫细胞）的检查，以及使用它们时制订严格要求，否则 就无从保证产品质量的安全性和一致性，并可能产生不希望产生的 遗传诱导的变化。 1.2 培养过程 无论是发酵还是细胞生产，关键是保证基因的稳定性、一致性 和不被污染。主要控制的有生产用细胞库、有限代次的生产、连续 培养过程。 1.3 纯化工艺过程 要求能保证去除微量DNA、糖类、残余宿主蛋白质、纯化过程带 入的有害化学物质、致热原，或者将这类杂质减少至允许量。 1.4 最终产品 主要表现在生物学效价测定、蛋白质纯度检查、蛋白质的比活 性、蛋白质的性质鉴定几个方面。 1.5 杂质检测 蛋白类，由于降解、聚合或者错误折叠而造成的目的蛋白变构 体在体内往往会导致抗体的产生；非蛋白类，主要有细菌、病毒、 热原质和 DNA 几种类型，往往在极低的水平就可以产生严重的危害 作用。 1.6 安全性试验 其中的无菌试验、热原试验、安全性和毒性试验按我国新颁布 的《中国生物制品规程》进行。 2 基因工程药物的检验 基因工程药物的质量控制需要采用理化、免疫学及生物学的方法 共同实现。目前在基因工程药物的质量控制中，理化测定代替生物 测定成为趋势，生物测定已退居为产品批准上市前做基础研究的生 物活性验证手段。下面为成品理化性质的检定。 2.1 蛋白质含量 通常是测定溶液中蛋白质的浓度，由于每一种蛋白质都含有恒 定量的氮元素，因此可以通过测定样品蛋白质中的氮含量来对蛋白 质定量。常用的方法有光吸收法、双缩脲法、福林-酚法等。 2.2 蛋白质纯度 是一个重要的指标。一般指是否含有其他杂蛋白，而不包括盐、 缓冲液离子、十二烷基硫酸钠（SDS）等小分子在内，根据中国生物 制品检定规程，要求考虑上述小分子的存在与否。常用的方法有聚 丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、等电聚焦（IEF）、毛细管电泳（HPCE）、 高效液相色谱（HPLC）等。 2.3 蛋白质的分子量测定 常用的方法有SDS、HPCE、质谱法等。 2.4 蛋白质等电点的测定 理论上，一种蛋白质只有一个等电点。常用的方法有IEF法等。 2.5 氨基酸组成分析 可以和标准样品进行比较，以确认重组蛋白质的氨基酸组成是 否和天然的蛋白质的氨基酸组成一样，如果是未知蛋白质，可以到 蛋白质数据库中查阅，看和哪一种已知蛋白质组成相同，再做进一 步确认，或者可能是一种新的蛋白质。常用的方法有水解蛋白质或 多肽、氨基酸衍生方法（茚三酮法、荧光胺法等）等。 2.6 部分氨基酸序列分析 首先将氨基酸一个一个依次从蛋白质或者多肽的末端（N端或C 端）切割下来，有化学法和酶法（化学法用得较多）；然后在氨基酸 残基上衍生一个生色集团，通过HPLC法进行分离测定。包括N 端氨 基酸分析和C端氨基酸分析。 2.7 肽图分