HSCCC综述.docVIP

高速逆流色谱及其应用 高速逆流色谱(high-speed counter-current chromatography，HSCCC)是由美国国立卫生研究院(National Institutes of Health，NIH)的Yoichiro Ito博士于上世纪80年代发明的一种基于液液分配机理的新型色谱分离纯化技术。经过几十年的实验研究，特别是近十多年高速逆流色谱的发展，使得它在生物医药、生化、植化、农业、化工、环境、海洋科学、无机化学等广泛领域显现出越来越高的实用价值。 目前国际上有数十个国家和地区的著名研究机构和大学在从事逆流色谱(CCC）技术的研究及在各个领域的应用工作。其中包括美国国立研究院（NIH），英国的Brunel大学，瑞士洛桑大学，法国里昂大学等。由于此项新颖技术的迅猛发展和不断成熟，加之其影响不断扩大，自2000年9月起国际逆流研究领域每隔2年举行一次世界逆流色谱学术会议。每年一度的美国匹兹堡国际分析化学与应用光谱学学术会议上，都设有CCC的专题组[1]。 我国高速逆流技术起步较早，目前也有多家高等院校和科研机构从事该技术的研究推广，并与逆流设备生产企业共同成功举办过多次学术交流活动。高速逆流色谱用于天然药物化学成分的分离始于1985年，到1988年、1989年达到一个高潮，期间发表了大量的文章。目前处于平稳发展阶段，在总的论文数量上我国学者已经占有相当大的比例[2]。 1 HSCCC原理及特点 1. 1　原理 流体动力学中有一种特殊的动力学平衡现象,即单向流体动力学平衡现象。HSCCC就是利用了这种现象来实现高速分离的。在这样的动力平衡体系中,两种互不混溶的溶剂相在转动螺旋管中单向地分布。高速逆流色谱仪工作时,色谱仪中的螺旋管做行星运动,由于重力及螺旋管力的作用,固定相移向螺旋管的入端,使得固定相得以保留,同时两相溶剂在螺旋管中得以混合。由于不同溶质在两相中的分配系数不同,溶质在两相溶剂中进行分配平衡,从而使不同成分得以分离。 1. 2 HSCCC的特点 高速逆流色谱所有的优点都源于其不用固体固定相，有广泛的容积体系可供选择。概括起来HSCCC具有以下优点[1]： (1)避免了样品在分离过程的不可逆吸附、分解等可能的样品变性问题。聚四氟乙烯管中的固定相不需要载体，可以消除气一液和固一液色谱中因使用载体而带来的吸附现象，避免样品在分离过程可能存在的变性，适用于分离极性物质和生物活性物质； (2)回收率高。由于液体作为流动相和固定相，滞留在柱中的样品可以通过多种洗脱方式予以完全回收，能够同时完成分离纯化与制备，适于制备性分离； (3)粗样可以直接上样而不会对柱子造成任何损害； (4)柱子可以用合适的溶剂（如甲醇）很容易地清洗，用空气或者氮气干燥，然后注入新的溶剂和构成新的柱体，可重复使用； (5)通过改变溶剂体系，实现对不同极性物质的分离； (6)被分离组分在柱中保留时间或保留体积可以通过其分配系数进行预测； (7)HSCCC的制备量可以比HPLC大，而且费用低，因为不需要昂贵的色谱柱。 另外，HSCCC在操作方面所表现出的灵活性和多功能性也是其他许多色谱所不能比拟的。比如：几乎任何互不相溶的两项溶剂体系都可以使用，只是有的溶剂体系可能在一些特殊型号的HSCCC仪器上可以取得更好的分离效果； HSCCC洗脱方式灵活多样，可以以正向或反向进行洗脱，也就是说流动相可以是上相或下相、有机相或水相,甚至可以是两项溶剂同时逆向流动，实现真正连续的逆流色谱过程；可以实现多种形式的梯度洗脱过程，如PH梯度、极性梯度等,也可用气体或者超临界流体作为流动相，实现特殊的分离过程；此外，进样方式也比较灵活，样品可以溶解在任何一相溶剂或混合溶剂中进样。 2 HSCCC溶剂体系的选择和优化 2. 1　溶剂体系的选择原则 溶剂体系是所有逆流色谱的心脏，它构成逆流色谱柱的固定相和流动相，对其选择是逆流色谱分离中首要和关键环节，HSCCC成功分离物质的关键就是选择合适的溶剂体系，但是溶剂体系的选择一般需根据实验积累的经验,而没有一套完整充分的理论依据，溶剂选择的困难也制约了逆流色谱的应用。 通常来说，两相溶剂体系应满足以下要求：（1）为了保证固定相保留值合适（不低于50%），溶剂体系的分层时间最好小于30 s。上下两相的相对密度差越大，保留率一般就会越高。（2）被分离化合物的分配系数K的选择范围为0.5~2.0。（3）上下两相的体积大致相等，以免浪费溶剂。（4）尽量采用挥发性溶剂，以方便后续处理，易于物质纯化[3]。 2.2 溶剂体系的筛选 随着逆流色谱应用的日益广泛，越来越多的研究人员针对不同的分离物质及类型进行相应的分离纯化研究。通常的筛选体系参考与待分离目标成分相类似的成分的分离实例，初步确定溶剂体系的组分及比例，进而根据具