小鼠肝脏过氧化物酶制备与测定.docVIP

小鼠肝脏过氧化物酶制备与测定摘要 目的　分离纯化过氧化氢酶，测定其相关性质。方法　采用。结论　60.25kD，以mol/L，酶层析后的比活0.686IU/mg。 SDS 前言 过氧化氢酶(Hydrogen Peroxidase)又名触酶(CatalaseCAT),是一种广泛存在于生物组织的氧化还原酶是一种四聚体血晶素酶, 由四个相同四面体排列的亚基组成,每一个亚基相对分子质量约60000每一个分子都包含有四个高铁血红素基团,分子量在240000左右。 近年来活性的测定被作为与肿瘤和抗衰老有关蛋白质的分离纯化方法是生命科学领域关注的热点之一1实验器材 1.1实验动物 昆明小鼠6只，雌雄不限，由河北医科大学动物实验中心提供。 1.2主要仪器 5200型紫外分光光度计（上海元析仪器有限公司），UV-5200 冷冻离心机(湖南相依实验仪器开发有限公司)，BCD-185冰箱（青岛海尔公司），微量移液器，40W匀浆器（江苏国华仪器厂），电泳仪（北京六一） 2实验方法 2.1　过氧化氢酶的分离提取 颈椎脱臼法处死小鼠只），取肝脏；加入51mL预冷匀浆缓冲液0.05mol/L,pH4.0醋酸缓冲液,23.5％乙醇），用组织捣碎机匀浆3min。缓慢滴加3mL的氯仿（边加边搅拌），再次匀浆1min；匀浆液4℃ 6000rpm离心30min，收获上清液。留样：取匀浆后上清液120μL，加入40μ