机能学实验设计-两种降血脂药物以及不同的给药方式作用效果的比较.docVIP

医学机能学实验设计书 实验题目:两种降血脂药物以及不同的给药方式作用效果的比较 实验设计：石佩玉、张晓芳、许亮亮、张兴杰、张兴明 实验小组：第6组（2009级临床医学14班） 指导老师：豆兴成 学 院：第二临床医学院 时 间：2012年3月9日 一.实验目的 1. 复习影响体内血脂浓度的因素,血脂升高的病因以及危害. 2.了解治疗高血脂的药物类型及作用机理. 3.学习实验法测血脂的方法. 二.实验对象 小鼠,20±2(g),雌雄不限 三.实验用品: 制造高血脂模型的poloxamer 407 治疗药物:第一种：羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制药:洛伐他汀或其类似药； 第二种:胆汁酸结合树脂:考来烯胺 四.实验原理 poloxamer 407 可使昆明小鼠的血甘油三酯和血胆固醇分别升高至基础值的40 倍和5 倍，且高血脂状态至少能维持72 h 以上。 降血脂的机理是: A还原酶是肝细胞固醇的限速酶，通过其抑制药抑制该酶的活性，从而抑制了胆固醇的合成, 第二种是此药进入肠道内后不被吸收,但可以与胆汁酸结合，从而通过减少脂类的吸收,阻滞胆汁酸的肠肝循环和重复利用,加快体内胆固醇转化为胆汁酸的速度,肝内胆固醇的减少有事的肝细胞表面的低密度脂蛋白进入肝细胞,从而减少了三酰甘油和胆固醇的量。根据预实验（见附加说明）所得结果，用下列方法分别测定总胆固醇和三酰甘油的含量。 五.实验方法 1.建立模型 动物禁食过夜后，一次性腹腔注射poloxamer407(0.3 g／kg)。 2.实验的基本过程:将50只小鼠随机分成10组。 第一组：不做任何处理用来测量正常小鼠血脂水平； 第二组：实验模型，但不给药，作为对照组； 第三组：高血脂，给羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制药； 第四组：高血脂，给考来希安； 第五组：高血脂，联合用药； 第六至十组重复一至五组给药方式。 根据预实验测得给药剂量和测定时间分别测定血清总胆固醇和三酰甘油浓度。最后将取得的数据做表，每两组比较，做统计学分析。 六.测定方法 1.高铁-硫酸显色法测定血清总胆固醇 1.1 原理 用异丙醇为溶剂提取血清胆固醇，向异丙醇胆固醇抽提液中加入高铁-硫酸显色剂，胆固醇与显色剂反应生成稳定的紫红色化合物，颜色深浅与胆固醇浓度成正比，可进行比色测定。 1.2 器材 带塞试管、微量移液器、721分光光度计、快速混匀器、离心机、恒温水浴箱。 1.3 试剂 （1）异丙醇（AR） （2）三氯化铁储存液：称取三氯化铁（FeCl3﹒6H2O AR0.1g，溶于100ml冰醋酸中。 （3）显色剂：三氯化铁储存液与浓硫酸（AR）按1:1体积混合。 （4）5.17mmol/L胆固醇标准储存液:精确称取重结晶胆固醇（MW 386.66）200mg，用异丙醇溶解并稀释至100ml，置冰箱保存。 （5）胆固醇标准溶液：5.17mmol/L胆固醇标准储存液4ml，移入100ml容量瓶中，加异丙醇至刻度线。 1.4 操作步骤 1.4.1 取血清0.1ml，置于带塞试管中，向管底吹入异丙醇2.4ml，冲散血清，使蛋白质沉淀，加塞混匀后置于60℃水浴1～2min。然后，于快速混匀器上混合15s。离心（3000r/min）5min，取抽提液待用。 1.4.2 取干燥试管3支，分别标记空白管、标准管和测试管，按下表加入试剂。 试管号 空白管 标准管 测试管 胆固醇标准液（ml） — 1 — 提取液(ml) — — 1 异丙醇(ml) 1 — — 60摄氏度恒温水浴1分钟 显色液(ml) 3 — — 60摄氏度恒温水浴15分钟 冷却后，选用波长540nm以空白管调零进行比色。读取并记下吸光度。 2.磷酸甘油氧化酶法测定血清甘油三酯 2.1 实验原理 血清中甘油三酯经脂蛋白脂酶（LPL）作用，可水解为 甘油和游离脂肪酸(FFA)，甘油在 ATP 和甘油激酶(GK)的作 用下生成 3-磷酸甘油， 再经磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二 羟丙酮和过氧化氢，过氧化氢与 4-氨基安替比林（4-APP） 和 4-氯酚在过氧化物酶（POD）作用下，生成红色醌类化合 物，其显色程度与 TG 的浓度成正比。? 2.2 器材 试管、微量移液管、721分光光度计、恒温水浴箱。 2.3 试剂 2.3.1 甘油三酯液体稳定酶试剂 GOODs 缓冲液（PH=7.2） 50 mmol/L 脂蛋白脂酶 ≥4000 U/L 甘油激酶 ≥40 U/L 磷酸甘油氧化酶 ≥500 U/L 过氧化物酶 ≥2000 U/L A