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2010级硕士研究生学位论文开题报告 转TaEBP基因新春9号小麦株系 分子检测与抗旱性鉴定 Molecule detection and Identification of Drought-resistance of Transgenic Wheat Xinchun No.9 with TaEBP Gene 学 院： 农 学 院 学科、专业： 作物遗传育种 研 究 方向： 农业生物技术 研 究 生： 陈 学 虎 指 导 教师： 陈耀锋 教授 研究生通过开开题论证日期： 2011年12月29日 开题论证委员会主席签名： 开题论证委员会委员签名： 转TaEBP 基因新春9号小麦株系分子检测与抗旱性鉴定 1 选题目的和意义 干旱、盐碱和低温冷害等非生物逆境是限制我国农作物生产的三大主要非生物胁迫因素。其中，干旱对农作物造成的损失最大，其损失量超过其他逆境造成损失的总和（Chen 2000），特别在干旱、半干旱地区，农业用水更为短缺。随着生态环境的不断恶化，水资源短缺的矛盾将会更加突出。近年来，由于灌溉水资源短缺引起的旱灾频繁发生，给我国农业生产带来了严重的损失。在50年代，我国遭受干旱灾害面积为1133万hm2，到80年代遭受干旱灾害的面积已经增加到2333万hm2，再到90年代的2667万hm2，每年因缺水而造成粮食损失700亿kg～800亿kg以上（李原园等 1997），旱灾已成为我国覆盖面最广、成灾损失最大的灾害，而且受灾面积逐年扩大，频率逐渐增加36%，占总耕地面积的43.19% 其他湿润半湿润地区也经常遇到周期性、季节性的干旱，给农业生产带来了巨大损失，干旱严重制约着干旱、半干旱区农业的发展。我国小麦耕地的1/3属于干旱、半干旱地区，干旱缺水已成为困扰该地区小麦生产的主要限制因素，严重影响着我国小麦生产水平的提高和籽粒品质的改善，威胁着国家粮食安全。对此，人们一直通过改善灌溉设施、改进灌溉技术等措施使干旱对农作物生产的危害得到了一定程度的缓解，但由于受资金和水资源短缺的制约，单靠灌溉措施缓解干旱胁迫的可能性将越来越小，而增强作物抗旱节水能力，培育抗旱节水小麦新品种才是解决干旱危害的最直接、最经济、最有效的途径。 近几年来，小麦品种的抗旱节水特性越来越受到人们重视，通过常规育种手段选育抗旱节水小麦新品种也愈受育种者们的普遍关注。 然而，由于植物对非生物胁迫的抗性一般受多基因调控，表现为复杂的综合数量性状遗传特点，通过常规育种手段进行多基因的转移不仅速度慢而且易受不良连锁性状的影响，仅仅依靠传统育种方法获得优良抗旱品种十分困难。加之，常规育种长期使用同类抗性亲本，致使育成小麦品种抗性的遗传基础狭窄，小麦抗旱种质资源单一或匮乏，虽然通过远缘杂交途径可以创造种质资源，提高普通小麦的抗逆性能，但其耗费时间长、育种效率低，无法满足当前作物生产对优异种质的迫切需求。 TaEBP 基因新春9号小麦株系、受体材料和当地主栽品种进行分子鉴定（Southern blot、Northern blot分析TaEBP 的拷贝数、表达特性等特点）以及各个生育期的抗旱性相关指标的鉴定分析，筛选出抗旱性强的转TaEBP 稳定株系，以增强转基因小麦的抗逆胁迫能力，创造耐旱或耐盐新种质（新品种）。 2 选题的依据（理论依据、技术依据、前期工作研究依据） 随着地球变暖和降水量减少，我国大部分地区旱情加重。我国主要麦区如华北冬麦区、黄淮冬麦区、西北春麦区等均属于干旱和半干旱地区，在这些地区的小麦生产中，开展节水农业、提高作物品种的耐旱能力、培育耐旱和抗旱的小麦新品种尤为重要。植物基因工程的发展为创造耐旱小麦新品种开创了新途径。 2.1 基因枪轰击法转化 是利用高速运动的金属微粒将附着于其表面的核酸分子引入到受体细胞中的一种遗传物质导入技术。基因枪法可以在一定程度上改善采用原生质体转化时培养及再生困难的障碍，重复性较高，操作也相对简单。基因枪法诞生不久后就相继在水稻、小麦、玉米、大麦、燕麦、高粱等重要的禾谷类作物中获得了成功。 2.2 PCR分子检测理论 利用PCR技术对目的片段进行快速扩增，实际上是一种在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下，利用DNA聚合酶的酶促反应，通过三个温度依赖性步骤完成的反复循环。 2.3 分子杂交 Southern杂交：Southern blot 是一种常用的 DNA 定量的分子生物学方法。其原理是将待测的 DNA