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姜黄素类似物H8对糖尿病肾病小鼠的治疗作用 Therapeutic effects of curcumin analogue H8 on diabetic nephropathy in mice 答 辩 人： 年级 专业： 目录 1 2 3 致谢 实验过程 实验结果 研究背景 4 1.研究背景 1.糖尿病肾病 2.炎症因子 3.姜黄素及其类似物 1.糖尿病肾病 糖尿病肾病是最常见的慢性糖尿病特发性全身微血管病变并发症，它不仅是致使糖尿病患者死亡的主要原因之一，也是导终末期肾衰竭的主要原因。 目前，国际上关于DN的治疗，尚无有效的治疗手段，寻找有效防治DN的新方法对糖尿病患者具有重要的临床意义。 2.炎症因子与糖尿病肾病关系的研究进展 TNF IL-6 IL-17 TNF-α可介导免疫调节，生长调节，炎症等多方面效应， IL-17，促进局部炎症的加重和扩大化。 IL-6可致使胰岛B细胞凋亡，在促进糖尿病的发生发展中有着重要作用。 炎症因子与DN的发生发展密切相关，在DN发生机制中具有重要的作用。 3.姜黄素及其类似物 姜黄素（curcumin）是从姜科黄属的干燥根茎中提取的一种天然的酚性化合物。研究显示姜黄素对由DN产生的异常变化，如肾小球增大、基底膜节段性的增厚等有明显的改善，可减轻肾脏高滤过的状态，降低尿液白蛋白，有一定的肾脏保护作用。此外，姜黄素还具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种药理作用，但姜黄素生物利用度较低，这使其临床的广泛应用受到了局限。 姜黄素类似物为改善姜黄素的稳定性和生物利用度，我们课题组发明了姜黄素类似物H8---以姜黄素为母体去掉其β二酮基团，设计了稳定的，分子量更小的戊-1,4二烯-3-酮类似物（H1-H9），在随后的实验中，我们证实了H8通过抑制炎症因子对糖尿病肾病小鼠产生治疗作用，减轻DN的发生发展。 3.实验部分 * 建模分组 糖尿病肾病模型组（DN),6只 姜黄素治疗组（Cur）6只 姜黄素类似物H8治疗组（H8）6只 空白对照组（Con）6只 8周龄SPF级db/db小鼠18只 8周龄SPF级db/m小鼠6只 标本收集与处理 禁食12 h，用小鼠代谢笼收集尿样本，用自动生化分析仪检测尿液中微量白蛋白尿（ MAU）和尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖甙酶（NAG）。乙醚麻醉猝死小鼠，眼球取血，解剖后取小鼠两侧新鲜肾脏，分别称重，称重后用生理盐水冲洗，小心解剖，留取肾脏标本，送红旗医院进行石蜡组织包埋。 MAU与NAG的检测 微量白蛋白(microscale albuminuria，MAU) 反映肾脏异常渗漏的蛋白质，是糖尿病影响肾脏的早期象征 NAG是一种细胞内溶酶体酶，主要用于早期肾损伤,和肾纤维化的监测和病情观察 免疫组化检测 4.实验结果 结果表明，与对正常照组相比，DN模型小鼠的血糖明显升高，姜黄素治疗组几乎不影响血糖变化，H8治疗组能明显降低血糖。所以说明姜黄素类似物H8有降低血糖的作用。 图1姜黄素及类似物对糖尿病肾病小鼠血糖的影响 （一）对血糖的影响 （二）对尿液中MAU(mg/l)和NAG(U/L)的影响 Group MAU(mg/L) NAG(U/L) Con 27±2 142±9 DN 129±7▲▲ 364±11 ▲▲ Cur 53±9* 278±33* H8 47±4** 219±16** 姜黄素及类似物对糖尿病肾病小鼠尿液中微量白蛋白的影响 实验结果表明DN模型组小鼠的MAU值和NAG值与正常对照组相比有明显的升高，姜黄素治疗组和H8治疗组的MAU值和NAG值与DN模型组相比有明显降低，且H8治疗组的作用效果略强于姜黄素治疗组。 ▲▲P＜0.01 VS Con, *P＜0.05 **P＜0.01 vs DN （三）对糖尿病小鼠肾脏组织中炎症因子IL-17表达的影响 图2 小鼠肾脏IL-17免疫组化检测结果 (200倍显微镜） DN模型组小鼠肾脏中炎症因子IL-17的表达量明显高于正常对照组小鼠，H8治疗组与DN模型组小鼠相比，肾脏中炎症因子IL-17的表达量明显减少。 （四）对糖尿病小鼠肾脏组织中炎症因子IL-6表达的影响 图3小鼠肾脏IL-6免疫组化检测结果 炎症因子IL-6在DN模型组小鼠肾脏中的表达量明显高于正常对照组，姜黄素及其类似物H8治疗组小鼠炎症因子IL-6的表达量较DN模型组明显降低。 (200倍显微镜） （五）对糖尿病小鼠肾脏组织中肿瘤坏死因子TNF表达的影响 图4小鼠肾脏TNF免疫组化检测结果 DN模型组小鼠肾脏中肿瘤坏死因子TNF的表达量明显高于正常对照组小鼠。姜黄素和H8治疗组小鼠肾脏中TNF的表达量较DN模型组有较明显得减少, 且H8对TNF表达的抑制程度强于姜黄素 (200倍显微镜） （六）结论