基于PCR及焦磷酸测序技术的单孢子虫鉴定技术研究及应用.pdfVIP

基于PCR及焦磷酸测序技术的单孢子虫鉴定技术研究及应用.pdf

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基于PCR及焦磷酸测序技术的单孢子虫 鉴定技术研究与应用 王彩霞 林祥梅 邓俊花 吴绍强 中国检验检疫科学研究院动植物检疫研究所,北京100029 为适应口岸单孢子虫快速、准确、高通量检测的需求,建立一种基于PCR及焦磷酸测序技 术平台的单孢子虫鉴定方法。以OIE推荐的PCR扩增方法获得单孢子虫特异基因,根据此基因的 保守序列利用焦测序软件PyroMarkQ96ID设计专用引物进行PCR扩增及焦磷酸测序,测得序列经 比对分析确定为单孢子虫序列。同时采用PCR焦磷酸测序方法和OIE推荐的PCR方法对牡蛎样 品进行检测。结果表明,所建立的检测方法可从基因序列水平上准确鉴定牡蛎样品中的单孢子虫,且 检测结果与OIE方法的检测结果一致。 尼氏单孢子虫; 牡蛎; 聚合酶链反应; 焦磷酸测序; 鉴定 Q75 A 1000-7075(2011)05-0092-05 EstablishmentandapplicationofHaplosporidiumnelsoniidentification basedonPCRamplificationandpyrosequencing WANG Cai-xia LINXiang-mei DENGJun-hua WUShao-qiang 2010年国家质检总局公益性行业科研专项(201010016)资助 2011-01-31 2011-03-18 王彩霞 (1982-),女,实习研究员,主要从事动物检疫研究。E-mail:friday128@,Tel:(010 93 94 95 @@[1]王宗祥,吴绍强,杨晓野.2011.我国沿海养殖牡蛎尼氏单孢子虫感染情况调查.中国畜牧兽医,38(5):158~160 @@[2]王中卫,吕昕,梁斌,梁玉波.2009a.长牡蛎尼氏单孢子虫的初步研究.海洋环境科学,28(2):164~166 @@[3]王中卫,吕昕,梁玉波.2009b.虾夷扇贝体内尼氏单孢子虫检测方法.大连海事大学学报,35(4):124~127 @@[4]王中卫,粱玉波,梁斌,吕 昕.2006.海产贝类尼氏单孢子虫病害的研究进展.现代生物医学进展,6(2):123~126 @@[5]陈之遥,周国华.2008.焦测序技术的研究进展.现代生物医学进展,8(8):1573~1576 @@[6]谢丽基,谢芝勋,庞耀珊,刘加波,邓显文,谢志勤.2009.三种贝类原虫多重PCR检测方法的建立.中国兽医科学,39(12):1080~1083 @@[7]谢丽基,谢芝勋,庞耀珊,刘加波,邓显文,谢志勤.2010a.贝类单孢子虫PCR检测方法的建立.中国畜牧兽医,37(1):54~56 @@[8]谢丽基,谢芝勋,庞耀珊,刘加波,邓显文,谢志勤.20l0b.贝类单孢子虫和折光马尔太虫二重PCR检测方法的建立.动物医学进展,31(1):54~57 @@[9]Andrcws,J.D.,andWood,J.L.1967.OystermortalitystudiesinVirginia.VL.HistoryanddistributionofMinchinianelsoni.,apathogenofoysters, inVirginia.Ches.SCi.8(1):1~13 @@[10]Tschentscher,F.,Ulrich,H.,Frey,U.H.,andBajanowski,T.2008.AmelogeninsexdeterminationbypyrosequencingofshortPCRproducts.Int.J. LegalMed.122(4):333~335 @@[11]Haskin,H.H.,Stauber,L.A.,andMackin,J.A.199

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