环介导等温扩增技术检测日本血吸虫尾蚴的实验研究.pdfVIP

ChinSchistoControl2008，VoL20，No．3 ·209· 中国血吸虫病防治杂志2008年第20卷第3期J [文章编号]1005-6661(2008)03--0209-03 ·实验研究· 环介导等温扩增技术检测 日本血吸虫尾蚴的实验研究 杨秋林1，许丽芳2，张愉快1，王可耕1 [摘要] 目的 建立一种检测日本血吸虫尾蚴的方法。方法 采用环介导等温扩增技术 (LAMP)：使用基因释放剂快速提取尾蚴基因组DNA，设计4条扩增尾蚴钙结合蛋白基因的LAMP 引物，进行LAMP反应，以华支皋吸虫为阴性对照．LAMP产物经显色、电泳鉴定。用细吸管在解 剖镜下分别吸取20、10、5、1条尾蚴进行LAMP反应，检测其敏感性。结果尾蚴检测管经显色后 呈绿色(阳性)，对照组呈棕色(阴性)。尾蚴LAMP产物电泳后呈LAMP特征性梯状条带，对照组 无扩增产物。LAMP可检测到尾蚴的最低数量为1条。结论LAMP方法敏感、特异、简便，可用 于检测日本血吸虫尾蚴。 [关键词] 日本血吸虫；尾坳，检测；环介导等温扩增技术 [中田分类号]R383．24[文献标识码]A ofSchistosoma Detection cercariaDNA japonicum byloop-me。_ diatedisothermal Yu- amplificationYangg扩lin-，池Li-fa九gz，Zh彻g (1 kuail，WangKe-gen91DepartmentofParasitology，MedicalCollege，Na砒uaUniversity， Hengyang421001，China；2DepartmentofDiagnosis，MedicalCollege，NanhuaUniversity，Chi— ha) Toestablishamethodfor cereariaofSchistosoma [Aharact]Objective detecting japonicum． Me缅odsThe isothermal used．ThecercariaDNAof loop-mediatedamplification(LAM噼)WaS Schistosomawasextracted which 6dis— GeneReleaser．Four japonicum byusing primersre(：o出d tinct onthe ofcercariaofSchistosomawere regionscalcium-bindingproteingene japonicumdesigned andusedfor andClonorchissineruiswas the controlfor the LA～伊assay usedas negative evaluating for and20，10，5，1cercariaeofSchistosoma were LAMPeva|ua— specificity japonicumamplifiedby the LAMPresultswere thenakedand sensitivity．The analysis． ring judged州th eyes electrophoretie RemitsAfterLAMPreaction，tlle wa