沉降菌检测培训(上传).ppt

员工内部培训教材 沉降菌检测培训 2016年07月14日 XXXXXX有限公司 沉降菌检测培训 执行标准： GB/T16294-2010《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》 沉降菌定义： 通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净室环境内的活生物数，以此来评定洁净室内（区）的洁净度。 需进行沉降菌检测的环境有： 十万级洁净室、一万级生化检测室、百级超净工作台和百级生物安全柜。 沉降菌检测培训 使用仪器： 1、净化工作台 2、电热培养箱 3、霉菌培养箱 沉降菌检测培训 使用仪器： 4、立式压力蒸汽灭菌器 5、电子天平 6、电热恒温鼓风干燥箱 沉降菌检测培训 使用器具： 1、量筒 2、三角烧瓶 3、培养皿（φ90×15） 4、酒精灯 5、不锈钢培养皿筒 6、牛皮纸 7、称量纸 使用试剂： 1、大豆酪蛋白琼脂培养基 或：胰酪大豆胨琼脂培养基 或 2、沙氏葡萄糖琼脂培养基 3、纯化水 沉降菌检测培训 检测前准备：（在化验室内操作） 1、将培养皿洗净、沥干，放入不锈钢培养皿筒，在电热恒温鼓风干燥箱内干烤。温度：160℃，时间：2小时。 2、根据需测量的区域确定培养皿的数量。 3、根据培养基用法及培养皿的数量确定培养基的数量（ml），用电子天平进行秤量配制，装入三角烧瓶内，再加入一定比例的纯化水，用硅胶塞塞住瓶口，用手腕晃动至培养基完全熔化，用牛皮纸包扎好。 配制过程（以配制“胰酪大豆胨琼脂培养基”为例） 根据培养皿放置分布图确定培养皿数量，再加3个对照试验培养皿。如：共需30个培养皿，每个培养皿注入15-20 ml培养基（按每个注入20 ml配制），则需培养基： 30个×20ml/个＝600ml。 根据产品标签上用法说明：取本品40.0g，加1L纯化水，微温溶解。 秤量： ×600=24.0g， 注入纯化水：600ml。 注：其他培养基的配制按产品上的标签用法类似配制。 沉降菌检测培训 检测前准备： 4、把包扎好的三角烧瓶放入立式压力蒸汽灭菌器中灭菌，温度：121℃，时间：15分钟。 5、把培养皿、配制好的培养基按《物品进出洁净室控制程序》进入无菌检验室。 6、操作人员按《人员进出洁净室控制程序》进入操作室。 无菌室操作： 1、开启净化工作台电源，在净化工作台内进行操作。 2、点燃酒精灯，打开三角烧瓶封口的牛皮纸，把三角烧瓶的瓶口在酒精灯的外火焰处转动消毒，时间：30秒。 3、拔出三角烧瓶的硅胶塞，无菌操作把培养基注入培养皿内，注入量为15-20ml，（注入时，应一手拿三角烧瓶，一手拿培养皿，用拿培养皿手的中指、无名指和小指抵住培养皿底，同时用大姆指和食指移开培养皿盖，注入培养基，整个过程尽量靠近燃烧的酒精灯，严禁在移开的培养皿上部有任何物品经过，防止产生假阳性。）加盖放在净化工作台内，直至所有的培养皿注入完毕，待至凝固（此时底下盖上）。 4、凝固后反扣叠放不锈钢培养筒内，盖好培养筒盖，出无菌室至室外待用。（反扣：培养皿底上盖下，防止冷凝水滴至培养基上，影响培养基效果。） 沉降菌检测培训 检测： 1、最少采样点数量的确定： 2、最少培养皿数： 沉降菌检测培训 房间面积 （m2) 洁净度级别 100（A级） 10000（C级） 100000（D级） ＜10 2-3 2 2 ≥10~＜20 4 2 2 ≥20~＜40 8 2 2 ≥40~＜100 16 4 2 ≥100~＜200 40 10 3 ≥200~＜400 80 20 6 ≥400~＜1000 160 40 13 ≥1000~＜2000 400 100 32 ≥2000 800 200 63 所需培养皿数 （沉降0.5小时） 洁净度级别 100（A级） 10000（C级） 100000（D级） 14 2 2 检测： 3、采样点布置类型：