TILLING技术研究进展和其在植物空间诱变上的应用前景.pdfVIP

ofAnhui 安徽农业科学。Journal Agri．Sci．2009，37(21)：9827—9829，9838 责任编辑王淼责任校对卢瑶 TILLING技术研究进展及其在植物空间诱变上的应用前景 任卫波1，郭慧琴2，徐柱1，赵亮2，王蜜2 (1．中国农业科学院草原研究所，内蒙古呼和浩特010010；2．内蒙古农业大学，内蒙古呼和浩特010018) 摘要在回顾11LLJNc／ec棚uJNG技术的发展及其应用的基础上，阐述了其在植物空间谤变研究领域的应用前景。 关键词空间诱变；TILLING技术；研究进展；植物 中图分类号S188文献标识码A 文章编号0517—6611(2009)21—09827—03 OilTILLING andIts in of ResearchProgress the MutationsPlants TechnologyApplicationForegroundSpace Wei·boal REN et Research of (GrasslandInstitute，ChineseAcademyAgriculturalSciences，Huhhot，InnerMongolia010010) AbstractBasedon the and ofTILLING／eeoTILLING inthe静 reviewingdevelopment technobgy．itsapplicationforeground application searchfieldof mutationsof were space plants expounded． words mutations；TILLING Key Space technology；Researchprogress；Plants 近地空间环境具有微重力、高真空、强烈的空间辐射及 构建。构建基因池时，要确保各个单株的DNA等量混合；⑤ 弱地球磁场等特点。这些特殊条件对进入其中的生物材料 目标基因选择和PcR扩增。根据目标基因序列设计一对特 具有特殊的复合诱变作用11-。研究和实践证明，空间诱变在 异引物进行PCR扩增。引物分别用700和800nm荧光染料 有效创造罕见突变基因资源和培育作物新品种方面已发挥 kb为宜；⑥ 标记。另外扩增区域不易太长，一般为1．O—1．5 出越来越重要的作用，成为空间生命科学研究的重要组成部 杂合双链形成。PCR完成后，PCR产物通过多次变性和复 分，并凸显良好的产业发展优势B-。然而，目前的空间诱变 性，以形成突变型／野生型的杂合双链；⑦酶切。用特异性核 还存在很多亟待解决的关键问题，尤其是在突变体的筛选工 酸内切酶酶切异源双链。一般使用CELl酶，该酶能有效识 作中旧J。常规的空间诱变变异体筛选是通过田问种植、单株 别并切开杂合双链中的不匹配位点，但是CELl的酶切环境 筛选、连续世代遗传稳定性观察3个步骤完成，这一过程存 对酶切效果影响很大。因此有必要进行条件优化。⑧酶切产 in· 在成本高、周期长、不可预见性等缺点。TILLING(Target物电泳分析。通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，然后用双 ducedlocallesionsingenomes)是一种低成本、高通量的反向 色红外荧光系统分析电泳结果，获得突变池；⑨利用相同方 遗传学变异体筛选方法。它将化学随机诱变(EMS)和基于 法从突变池中筛选突变个体；⑩突变个体PCR片段测序。 PcR特定基因位点突变筛选有机结合起来HJ。目前已成功 通过全片段测序，确认核酸多态的类型、位置和数