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和突变 临床检验通讯 临床检验通讯 2016 3 2016 10 31 年第 期 年 月 日 主办：检验科 主编:陈葳 副主编:王亚文 检验科分子诊断项目简介 最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序 一．MTHFR基因分型检测 列。据此可重组出靶核酸的序列。 1. 检测原理： 具体检测过程为从人外周血细胞中提取基因组 5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是叶酸 DNA；用MTHFR 基因特异引物经过PCR 扩增后， 代谢中的关键酶。它可以将5,10 一亚甲基四氢叶 将带有生物素标记的扩增产物与固定在醛基基片 5- , 酸还原为 甲基四氢叶酸 从而作为甲基的间接 上的MTHFR 基因型检测探针进行特异性杂交反 供体参与体内嘌呤、嘧啶的合成及DNA、RNA、 应，并通过酶促显色反应，使特异性杂交信号呈现 蛋白质的甲基化，同时维持体内同型半胱氨酸 出颜色；通过对芯片进行扫描，型探针杂交形成的 （Homocysteine，Hcy）的代谢平衡。MTHFR 基 杂交图像；经过软件分析该图像，判断待检样品的 677 C-T MTHFR 因 位 的改变可导致 酶活性降低， 基因型。 造成叶酸代谢障碍，从而引发多种疾病，其中以高 2. 标本要求： 同型半胱氨酸血症引起的脑卒中以及新生儿缺陷 抗凝血2ml，血常规管 （即EDTA抗凝管）。 最为严重。MTHFR 基因(677位点)存在遗传多态 3. 临床意义： CC CT 性，即： 型 （野生型）、 （突变杂合型）和 MTHFR 基因677位由C 突变为T 可导致蛋白 TT （突变纯合型）。 一级结构中丙氨酸被缬氨酸替代，从而降低蛋白活 此项检测是基于基因芯片技术。基因芯片的测 性和热稳定性，导致叶酸代谢通路异常。由于叶酸 序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的 的缺乏可能导致： 核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基 1 （）孕妇妊娠高血压和习惯性流产 片表面固定了序列已知的八核苷酸探针。当溶液中 （2）新生儿出生缺陷(如：神经管缺陷、唐氏综 带有荧光标记的核酸序列，与基因芯片上对应位置 合症和唇腭裂) 的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度 3 （）高同型半胱氨酸血症，增加动脉粥样硬化、 得到样品DNA扩增产物与每个基因位点的野生型 冠心病和脑卒中的发病风险。 因此，基因检测的意义在于： 严密监视血压防止妊娠高血压的发生。 1）指导孕妇合理补充叶酸 MTHFR 基因 CC 型孕妇：只需按推荐剂量每 参照 《中国居民膳食营养素参考摄入量》和美 日补充400ug 叶酸即可，同时注意膳食中的叶酸摄 国疾控预防中心建议，推荐孕期每天补充400 微 取。 克叶酸，将显著降低新生儿的出生缺陷。对于 叶酸摄入不宜过量，长期过量服用 （每日超过 MTHFR 基因异常的人，酶