参数实验指导-2017年11月.docVIP

发酵工业分析实验 目录 实验一 样品中还原糖的测定（斐林试剂法） 实验二 白酒中总酸的测定 实验三 白酒中总酯的测定 实验四 比重瓶、折光仪、旋光仪的使用 实验五 大肠杆菌生长曲线测定 实验一 样品中还原糖的测定（斐林试剂法）（3学时） 一、实验目的： 掌握斐林试剂测定还原糖的方法。 测定酿造酱油中还原糖的含量。 二．实验原理 斐林试剂由甲、乙液组成。甲液为硫酸铜溶液，乙液为氢氧化钠与酒石酸钾钠溶液。平时甲、乙液分别贮存，测定时甲、乙液等体积混合。混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀： 所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钾钠反应，生成酒石酸钾钠铜络合物，使氢氧化铜溶解： 酒石酸钾钠铜络合物中二价铜是一个氧化剂，能使还原糖中羰基氧化，而二价铜被还原生成一价的氧化亚铜沉淀： 反应终点用次甲基蓝指示刘显示。因次甲基蓝氧化能力较二价铜弱，故待二价铜全部被还原后，过量一滴还原糖立即使次甲基蓝还原，溶液蓝色消失以示终点： 三、试剂 1 菲林甲液称取分析纯硫酸铜(CuSO4·5H2O)15g及四甲基蓝 (次甲基蓝) 0.05g,用蒸馏水溶解,淀容至1000mL。2 菲林乙液称取分析纯酒石酸钾钠50g,分析纯氢氧化钠54g及分析纯亚铁氰化钾4g,用蒸馏水溶解,定容至1000mL。3 0.1%葡萄糖标准溶液精确称取在105℃烘 2～3h至恒重的分析纯无水葡萄糖1.000g,放入100mL烧杯中,用蒸馏水溶解,定容至1000mL,为防染菌,可加 5mL浓盐酸后再定容。 四．测定步骤 1. 样品处理及吸取 精确吸取样品10mL,用蒸馏水稀释定容至100mL,摇匀吸取稀释液 1mL进行测定。稀释度及吸取量根据含糖量可予增减。 2 菲林试剂的标定 精确吸取费林甲、乙液各5mL放入150mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL。再用滴定管加入0.1%葡萄糖标准液9mL。摇匀在电炉上加热,使其在2min内沸腾,沸腾30s后,匀速滴入0.1%葡萄糖标准液至蓝色消失即为终点。记录沸腾前后共耗用葡萄糖液毫升数(A)。3 预备滴定 精确吸取费林甲、乙液各5mL,放入150mL锥形瓶中,加蒸馏水10mL,再加1mL10%样品稀释液。根据样品含糖量的高低(估计数),可用糖液滴定管先加入一定量的0.1%葡萄糖液(空白滴定耗用葡萄糖液一般在10mL以上),摇匀加热,沸腾30S后,匀速滴入0.1%葡萄糖液,至蓝色消失即为终点,记下沸腾前后共耗用0.1%葡萄糖标准液毫升数,作正式滴定时参考用。4 正式滴定 精确吸取费林甲、乙液各5mL,放入150mL锥形瓶内,加蒸馏水10mL及1mL10%样品稀释液,再用糖液滴定管加入比预备滴定耗用量少0.5mL左右的0.1%葡萄糖标准液,摇匀后加热,使其在1～2min内沸腾,沸腾30S后匀速滴入0.1%葡萄糖标准液至蓝色消失即为终点,记下沸腾前后共耗用0.1%葡萄糖标准液的毫升数 (B)。做平行测定,两次相差不得超过0.1mL。1.3 计算 (A -B) ×C还原糖 (以葡萄糖计,g/100mL或g) ＝─────×100………………… (1) V式中: A——菲林试剂标定耗用0.1%葡萄糖标准液数, mL; B——正式滴定耗用0.1%葡萄糖标准液数, mL; C——1mL0.1%葡萄糖标准液含葡萄量 (即0.001g); V——吸取样液相当样品量,mL 注意事项1 每批试样测试前必须做空白滴定,二次平行测定误差不得超过0.1mL。2 空白滴定、预备滴定及正式滴定操作条件应保持一致。滴定速度应以每秒 1～2滴为宜。热源要稳定,在正式滴定时,待试样沸腾后,标准糖液的滴定量必须控 制在0.5～1mL之内,否则要重做。整个滴定过程必须始终保持沸腾状态。3 凡样品含糖量在6%以上时,应适当增加稀释倍数,否则会加大误差。4 酿造酱油在制品常含有非糖还原物质,所以本法测定结果略为偏高。 实验二 白酒中总酸的测定（3学时） 一．原理 白酒中总酸以中和法直接测定。挥发酸用水蒸汽蒸馏，馏出液以中和法测定，总酸和挥发酸之差即为非挥发酸。 二．试剂 1)0.1N氢氧化钠溶液 2)0.5％酚酞指示剂．测定步骤 50毫升白酒，置500毫升三角瓶中，加100毫升水和 2滴 0．5％酸酞指示剂，用 0．1N氢氧化钠溶 式中 N、V——氢氧化钠溶液的当量浓度与消耗体积（毫