临床基因扩增检验培训班-核酸化学概论-2017年10月.ppt

原核生物启动子结构特点： 一致性序列(concensus保守序列)： 碱基序列相对稳定，不易发生突变。 TTGACA：-35区，RNA聚合酶的辨认位点，结合疏松，是σ亚基结合位点。 TATAAT：-10区，Pribrow盒，RNA聚合酶的稳定结合位点。β亚基的结合位点。 TATA盒 CAAT盒 GC盒 增强子 顺式作用元件 结构基因 -GCGC---CAAT---TATA 转录起始 真核生物启动子保守序列 四、 终止因子（termination factor）  ρ因子（rho factor）  ----协助RNA聚合酶辨认终止区并终止转录 转录过程 The Process of Transcription 第二节 原核生物的转录过程 （一）转录起始 转录起始需解决三个问题： RNA聚合酶必须准确地结合在转录模板的起始区域。 DNA双链解开，使其中的一条链作为转录的模板。 转录起始复合物形成。 辨认起始位点： ?亚基辨认启动子的－35区，RNA聚合酶全酶 (?2????)与模板疏松结合。 酶滑行到－10区，通过??亚基与模板牢固结合。 2. DNA双链解开: RNA聚合酶挤入DNA双链中，解链长度约20个核 苷酸， 拓扑异构酶参与。 转录起始过程： 3. 在RNA聚合酶作用下发生第一次聚合反应，形成转录起始复合物。 RNApol (?2????) - DNA - 5pppGpN- OH 3? 转录起始复合物: RNA聚合酶-DNA模板-四磷酸二核苷酸 5?-pppG -OH + NTP ? 5?-pppGpN - OH 3? + ppi （二）转录延长 1. ?亚基脱落，RNA–pol聚合酶核心酶变构，与模板结合松弛，沿着DNA模板前移； 2. 在核心酶作用下，NTP不断聚合，RNA链不断延长。 (NMP) n + NTP ?? (NMP) n+1 + PPi 3. 转录空泡的形成： 目 录 DNA/DNA双链比DNA/RNA杂化双链稳定 稳定性: G≡CA=TA=U DNA双链超螺旋作用 5? 3? DNA 原核生物转录过程中的羽毛状现象：边转录边翻译 核糖体 RNA RNA聚合酶 依赖Rho (ρ)因子的转录终止 非依赖Rho因子的转录终止 （三）转录终止 RNA聚合酶在DNA模板上停止前进，转录产物RNA链从转录复合物上脱落。 机制 A T P 依赖 Rho因子的转录终止： 具有控制转录终止作用的蛋白质因子。 机制： Rho因子与RNA3’-OH的poly C结合， 抑制聚合酶活性，激活解螺旋活性。 2. 非依赖 Rho因子的转录终止 DNA模板近终止处，有特殊的碱基序列，转录出RNA产物形成特殊的结构终止转录。 发夹或茎环结构：局部二级结构 末端PolyU：U:A不稳定. 5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU... 3` 5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU... 3` RNA 5?TTGCAGCCTGACAAATCAGGCTGATGGCTGGTGACTTTTTAGTCACCAGCCTTTTT... 3? DNA UUUU...… UUUU...… 5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU... 3` 茎环(stem-loop)/发夹(hairpin)结构 真核生物的转录后修饰 Post-transcriptional Modification 第三节 几种主要的修饰方式 1. 剪接(splicing) 2. 剪切(cleavage) 3. 修饰(modification) 4. 添加(addition) 一、真核生物mRNA的转录后加工 （一）首、尾的修饰 5?端形成 帽子结构 (m7GpppGp —) 3?端加上多聚腺苷酸尾巴 (poly A tail) 鸡卵清蛋白成熟mRNA与DNA杂交电镜图 DNA mRNA 目 录 （二）mRNA的剪接 2.外显子(exon)和内含子(intron) 外显子：（基因上的编码序列） 在断裂基因及其初级转录产物上出现，并表达为成熟RNA的核酸序列。 内含子：（基因上的非编码序列） 在断裂基因及其初级转录产物上出现，而在剪接过程中被除去的核酸序列。 鸡卵清蛋白基因 hnRNA 首、尾修饰 hn