LabWork 4.0图像分析软件.doc

LabWork 4.0图像分析软件 简要说明 基因公司 Gene Company Limited 一、常用工具栏：定义了Labwork常用功能的快捷键. 上图为Labwork 常用工具栏，各项功能依次解释如下： 打开图像文件; 保存文件; 从数据库中打开文件; 图像捕捉; 扫描图像; 打印当前文件; 调用报告生成器; 取消/重做最后一次操作; 取消当前选定区域，并重新开始选定新区域； 使用长方形工具选择区域； 使用椭圆形工具选择区域； 使用自定义工具选择区域； 对图像文件进行标注； 图像缩放工具； 图像不满屏时用于定位图像； 对图像的进行手动对比度调整； 对图像进行自动对比度优化； 恢复图像原有的对比度值； 对图像进行染色； 进行DNA、RNA和蛋白质凝胶条带分析； 进行点阵分析； 进行克隆计数分析； 进行区域密度分析。 二、定量分析的一般步骤： 1、从菜单栏选择选项File下的Experiment，出现如右图所示画面，根据实际实验类型选择相应的Function Type， 按OK确认。 2、 打开要分析的图像文件，按 调出 如右图所示条带分析工具栏，各选项功能 依次为： Rotate：旋转图像； Lane/Bands：标记泳道及带； Background：校正背景； M．W．Standard：定义分子量标准； Slant：校正条带偏移； Mass/IOD：显示及计算定量值及分子量； Save：保存实验信息及结果至数据库中。 3、通常情况下，Labwork会以垂直方向确定泳道，因此首先要使用Rotate命令尽量把图像旋转成泳道垂直向下方向，按Rotate项后，图像上出现格栅线，在图上按住鼠标左键旋转格栅线直到与泳道平齐，按OK键即出现以“untitled0”命名的旋转后的图像。 4、调整完毕后，按Lane/Bands出现如右图的画面，就可以进行泳道及带的标记，上半部分可以进行显示泳道（Always show lanes），设定泳道宽度（Lane Width），添加（Add Lanes）或删除（Delete Lanes）泳道，自动搜索泳道（Find Lanes），调整弯曲泳道（Curve Lanes）；下半部分可进行添加（Add Bands）、删除（Delete Bands）带，自动搜索带（Find Bands），并设定搜索带的灵敏度（Min. Band height），带的类型（Dark或Bright Bands）。 添加泳道：按“Add Lanes”按钮后出现如右图对话框，可分别选择添加垂直泳道（straight lanes）或弯曲泳道（curved lanes）；添加垂直泳道时，移动鼠标至图片时会显示一可移动的方框，移动至合适的泳道位置按鼠标左键即可；假如要定义弯曲泳道，依次定出泳道转折处的中点，再按鼠标右键即可完成定义；泳道定义完毕，按“OK”确认，返回上一级条带工具栏，此时可以移动泳道位置：移动光标至泳道，出现四方向箭头时按住鼠标左键即可移动泳道；或调节泳道高度：将光标放在泳道起始处或结束处，出现上下箭头时按住鼠标左键可向上下调节泳道高度。 添加带：按“Add Bands”按钮后，出现如右图对话框，移动光标到要添加带的位置，按鼠标左键可逐一添加，完成后按“OK”确认。 定义完泳道及带后，可以用菜单栏的“1D-Gels”项下的“Show Graph…”显示如下图的泳道轮廓图（Lane Profile），该曲线显示的是光密度值（optical density，例如凝胶的图像）或亮度值（intensity，例如荧光图像）。每一条曲线代表一条泳道，X轴代表分子量（Mol. Weight），Y轴代表光密度值，每条泳道上的带都分别对应曲线上编了号的波峰，位于波峰之下并被两个垂直标记所包围的就是用于计算光密度值的面积，可以用鼠标直接在图上调节这两个垂直标记的位置来可改变该带用于计算光密度值的面积。 5、背景校正：Labwork通过定义几种不同基线（Baseline），消除背景对定量结果的影响，按Background出现如右图所示的对话框，提供以下选项： Flat：从轮廓图最低点引一水平线作为基线； Join Valleys：用平滑曲线连接轮廓图最低点作为基线； From Image：直接在轮廓图上定义一条平行于泳道的直线，以其光密度曲线作为基线，该直线可用Add Line项加入； None：不做背景校正。 6、通常情况下，Labwork默认同一分子量的带都是在同一水平线上的，假如由于其他原因出现同分子量的带不在同一直线上，可以使用Slant项进行校正，按Slant后出现如右图对话框，在定义了多条标准分子量泳道时，可使用Auto.Slant Lines进行校正；也可以用