枯草芽孢杆菌的分离纯化.pptVIP

枯草芽孢杆菌的分离纯化 目录 菌种简介 分离步骤 生理生化鉴定 发酵条件的优化 脂肽类抗生素的提取——酸沉淀法 脂肽类抗生素的HPLC定量检测 讨论 菌种简介 无荚膜，周生鞭毛，革兰氏阳性菌，有芽孢，菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，需氧菌。可利用蛋白质、多种糖及淀粉，分解色氨酸形成吲哚。广泛分布在土壤及腐败的有机物中。 枯草芽孢杆菌在自然生长和发酵培养 产生的脂肽类抗生素具有很强的抗真菌、病毒、肿瘤、支原体活性，在防治植物病害上具有广阔的应用前景。 分离原理 芽孢杆菌能产生芽孢，在沸水中加热不会失去生理活性，但是不能产生芽孢的细菌会失去活性，因而得到芽孢菌属，经过进一步的分离及生理生化鉴定得到枯草芽孢杆菌。 分离步骤 （1）土样的采集：取土壤表层5-10cm下的肥土100g左右，把采得的土壤放入纸袋带回实验室分离。 （2）平板的制备：溶化三角瓶中的牛肉汤蛋白胨培养基，以每皿20ml左右倒6个平板。 （3）稀释分离法：称取土壤5g放入含有45ml水的三角瓶中，摇动片刻，然后将此瓶用小火加热至悬浊液沸腾，维持15min。而后静止5min，吸取上层液0.1ml加入到含有4.5ml无菌水的试管中，制成1:100浓度的悬液，然后吸取土壤悬浊液0.2ml滴加到牛肉膏蛋白胨培养基平板上，用涂布棒均匀涂布，并将培养基倒置于37℃恒温培养1-2天。