养精种玉汤对SD孕鼠生殖状态影响探究.docVIP

养精种玉汤对SD孕鼠生殖状态影响探究 　　摘要：目的 探讨养精种玉汤对SD孕鼠生殖状态影响，对其生殖安全性进行研究。 方法 采用养精种玉汤不同剂量对SD孕鼠体内染毒，观察其吸收胎、畸胎等，并观察胎仔内脏、骨骼及胎仔体质发育等异常状况。结果 其不同剂量对孕鼠胎仔活胎率、吸收胎率和畸胎率影响，以及对胎仔内脏、骨骼和体质发育影响，与溶剂对照比较均未见明显差异。结论 养精种玉汤药液在本研究所确定的50g/kg 剂量浓度以下，初步认为对健康育龄SD孕鼠生殖功能及其胚胎发育无明显损害。 关键词：养精种玉汤； 生殖毒性；安全性； 养精种育汤乃清代山西太原府名医傅山所创，出自《傅青主女科》，原为治疗身瘦不孕，后经多年来临床医家们的反复实践与锤炼，现已演绎成为治疗不孕症的基础方。有效评价药物对女性生殖功能的影响有着深远意义，女性生殖系统是药物作用的一个特有的靶器官，女性生殖系统复杂且所有配子在出生前就已形成，所以其损害可能是多靶点及永久性的[1]。有鉴于此，本文通过其不同剂量对SD孕鼠体内染毒，进行生殖毒性测定，以期获得其继药效学之后的临床前毒效学资料，为其促孕合理及安全应用提供实验学依据。 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1 药液制备 对所需中药药材的来源及品种进行鉴定，筛选优质正品，原料经品种鉴定无误后，再进行挑选和洗净，然后炮制、切片、烘干、粉碎。严格按照经典处方比例用量配备，采用制备工艺如下：① 取经加工炮制的标准中药饮片（白芍、山茱萸）用70%乙醇回流提取2次，每次1小时，合并提取液滤过，回收乙醇； ②其余药与白芍、山茱萸药渣混合，水液煎煮2次，每次1.5小时，合并滤液，滤过滤液浓缩至相对密度为1.1-1.2（50-600c），加入乙醇使醇含量达65%，冷藏24小时，醇液滤过，滤液回收乙醇，至无醇味。③ 以上两液合并，冷藏放置，视无沉淀析出；④ 添加蒸馏水，调pH值至6.5～7.0， 并调整至相当于含生药2g/ml；⑤ 精滤、灌封、灭菌即得。 1.1.2 主要试剂与仪器 40%甲醛，北京化学试剂公司生产；冰乙酸，北京化学试剂公司生产；95%乙醇：北京化学试剂公司生产。丙三醇：北京化学试剂公司生产。光学显微镜：日本OLYMMPUS SZ-ST型。电子分析天平：美国AG-104，感量值0.01g。 1.1.3 实验动物 取经检疫1周的健康性成熟未经交配生育的Sprague-Dawley SPF/VAF级大鼠，雌雄各100只，年龄约 80～90d，体重约200～220g（♀），350～380g（♂）。以上动物由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物合格证号：SCXK（京）2007-0001。使用北京科澳协力饲料有限公司生产的标准膨化饲料在标准饲养盒内喂养，饲料合格证号：SCXK（京）2005-0007。每盒5只， 盒内保持清洁干燥，定时定量向饲料盒添加足量饲料，由动物自由摄食。饮水采用经DWT型二氧化氯消毒机处理后聚乙烯塑料瓶装消毒饮用水，由动物自由饮用。每日清洗饮水瓶，并更换饮用水1次。SPF级动物房日光灯明暗交替12h，室温22℃～25℃，湿度30%～70%。 1.2 方法 1.2.1 实验分组 采用交配前计算器随机动物分组法：将雌鼠称重后按随机数字分组编号，设溶剂对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组（Ⅰ-Ⅳ组），以每组5只（1盒）将雌鼠分配，并使各组鼠数相等。分组完毕后将每盒鼠用饱和苦味酸标记，每只大鼠设一个独立编号。动物编号、剂量分组号、体重等均做记录。最终各实验组分组只数见实验表。 1.2.2 给药方法 各剂量组大鼠分上下午2次固定时间灌胃给药，与人临床拟用途径相同，给药剂量见各表。雌鼠为交配前每天给药2次， 连续14天，同时同笼及交配后继续给药至妊娠后第6天结束。给药期间依体重变化随时调整给药体积。溶剂对照：同期灌胃蒸馏水，给药体积设计与各剂量组给药体积相当，并依体重变化随时调整给药体积。 1.2.3 实验步骤及观测指标 交配前期内每天采用啮齿类动物阴道细胞学检查法观察雌鼠动情周期1次，确定雌鼠每天所处动情周期的阶段，记录于表格，共14天。交配前期内每周测定2次每笼大鼠摄食量，并计数。给药期间每7日称2次体重，GD15再称重一次，并计数。妊娠第15天时用颈椎脱臼法处死孕鼠，孕鼠处死后立即称重， 计算妊娠期孕鼠体重，并计算摄食量。切开腹部暴露两侧子宫和内脏器官， 并计数总着床数、黄体数。发现任何内脏有异常应作好记录， 并将所有异常组织切下来， 做标记放入10%福尔马林中固定， 并做组织病理学检查。将左右两侧子宫从母体切下， 称量子宫、阴道、卵巢重量。纵向切开子宫， 分离出胎仔， 记录死胎数、活胎数、吸收胎数，并称量每窝活胎重量。并计算孕鼠交配率、受孕率和死亡