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冰淇淋菌落总数实时荧光光电快速检测方法建立和初步应用 　　随着人们生活水平的不断提高，微生物对食品的污染也相应地成为食品安全中备受关注的突出问题。在食品生产、加工、包装、储存、运输和销售的各个环节中都有污染微生物的可能。一旦污染，微生物将大量繁殖而引起食品腐败变质，或导致食源性感染或食物中毒。目前传统的微生物检测方法主要是形态检查和生化方法，虽然其灵敏度和特异性较高，但所涉及的实验较多、操作繁琐、需要时间较长、准备和收尾工作繁重，仍然是劳动密集型工作。所以准确、省时、省力的快速微生物检测方法已是社会的迫切需要。 相比传统微生物培养，自动化的微生物检测系统具有操作简便、快速、无需配套的专业实验室和增加过多专业人员等优点，因此非常适合企业自检使用。这其中具有代表性的就是美国BioLumix实时快速微生物荧光光电检测系统。该系统将最新的荧光光电技术、染色技术、CO2传感技术和特异性的培养技术结合在一起检测生物体的代谢过程，使之能够同步检测颜色和光子的变化。目标微生物在特定培养基中的生长和代谢可通过感光试剂（色彩和荧光染色）检测。当代谢过程发生时，试剂的光谱模式会发生改变；光传感器检测到这些变化后以预先设定好的时间间隔进行监控并报告检测结果。菌量越高检测时间越短。 冰淇淋是广受消费者尤其是青少年喜爱的即食冷冻食品，微生物指标的准确快速检测和严格控制具有非常重要的意义。然而冷冻食品中的微生物有其自身的特点，微生物在冷冻条件下处于休眠状态，并逐渐适应了超低温的环境。在检测时既要对这些受伤的细菌进行修复，又要使其在常规的培养温度下和传统的48小时内充分生长并准确计数，就不是一件容易的事情。 二氧化碳是所有微生物代谢的产物。为了建立一个准确而快速的冰淇淋总菌检测方法，故采用以二氧化碳传感和实时荧光光电检测为主要技术的BioLumix检测系统来完成本次实验。 本实验采用BioLumix系统中的曲线法来定量检测冰淇淋中的菌落总数。即用自然样本和增菌处理过的冰淇淋样品制作一条菌落总数校准曲线，然后在BioLumix系统中使用这条校准曲线直接进行冰淇淋样品中菌落总数的定量检测，同时与国标检测方法的结果进行对比，以此确定BioLumix系统对冰淇淋中的菌落总数检测的适用性。 实验 仪器与材料 BioLumix实时快速微生物荧光光电检测系统；国内某厂家提供的各种口味的冰淇淋。 曲线制作方法 1.样品的处理与制备 取含巧克力与水果成分的奶料雪糕1∶10稀释后121℃高压灭菌15分钟，冷却后备用，编号AX。 取相同雪糕25g，与225mL、0.85%生理盐水混合均匀，编号A1。 取A1 5mL，与45mL AX混合均匀，编号A2。 将同一批次的巧克力水果口味的雪糕进行增菌和冷冻，然后取25g与225mL、0.85%生理盐水混合均匀，编号AZ1。 2.样品的稀释 取AZ1 5mL，与45mL AX混合均匀，编号AZ2； 取AZ2 5mL，与45mL AX混合均匀，编号AZ3； …… 依此进行6个梯度的10倍稀释。 4.重复实验 为了使得到的校准曲线更准确，准备多个样品，重复上述步骤，以得到至少30组数据，数据组越多，校准曲线越准确。 5.校准曲线的建立 将上述多个样品的BioLumix系统的DT（检测时间）和对应的平板菌落总数值输入到BioLumix软件界面中，经过修整后，得到一条以DT（检测时间）为横轴，以相应的菌落总数值（CFU/mL）的对数LogCFU作为纵坐标的校准曲线。 6.校准曲线的验证 取同一厂家生产的多个品种和批次的冰淇淋各25g与225mL、0.85%的生理盐水混合后各取1mL分别加入BioLumix系统菌落总数检测管中上机检测，同时对同一样品按GB 4789.2-2010做平板培养。将得到DT值，带入校准方程中，得到BioLumix系统报出的CFU值，与对应的平板菌落总数值对比。 讨论 采用所建立的校准曲线对30例不同种类的冰淇凌产品进行了验证，结果表明在1000CFU/g以内的样品中有29例BioLumix系统快速检测结果与国标平板结果基本一致。1例样品的两种检测结果出现了偏离，即BioLumix系统检测结果（1200cfu/g）高于平板结果（550 cfu/ g）。由于这例出现偏离的结果是BioLumix系统高于平板计数，因而不会出现BioLumix系统漏检超标样品的情况；实际应用中可通过复检进行确认。 此外，由于本次实验所使用的同一厂家生产的冰淇淋，其产品的菌含量一般都控制在1000CFU/g以下，无法得到自然条件下的高菌含量样品，因此未能对所建立的菌落总数校准曲线的高点部分