生化应用方面的一些知识之二.doc

生化应用方面的一些知识?之二 2014-08-12??yeec维修网 4、新上项目:在新开展项目之前，需要进行参数的设置。而在参数设置之前要做下列准备工作：a、准备试剂、校准品（定标液）和相应的质控；b、准备微量样本杯，分配校准品和质控品；c、准备试剂说明书、相应的上机参数；d、翻看仪器的操作说明，登记项目、试剂及校准品的名称、位置、容量、有效期等信息。e、参数录入f、进行校准和质控，判断校准数据、校准曲线和反应曲线是否符合反应趋势，进而修正参数的部分细节。判断质控是否在控。g、样本测试，进行重复性验证和线性验证。4.1准备试剂、校准品和相应的质控：如果对溯源要求很高，那当然是封闭型设备的原厂试剂原厂质控校准品，省心省力。而第三方试剂、校准、质控，也能溯源，只不过麻烦些而已。很多医院增设新项目，选择第三方试剂的原因就是考虑成本问题。最怕的是试剂、校准、质控是三个不同厂家的，不用说溯源，就是保证结果都不容易。一般的组合是试剂厂家提供试剂和校准品，采用第三方质控；或者试剂厂家只提供试剂，校准品和质控品为另一个厂家，比如朗道的，这样会多少好一些。准备的试剂、校准品和质控品一定都要有效期内，而且是未开封未复溶的产品。已经开封使用过的，暴露在阳光下常温下不知道多久的，最好别用，说不清楚。质控和校准品一般都是干粉的，先复溶使用。很多医院把校准品和质控品复溶后分装使用，这在新上项目上最好别这么做，不能处处都说不清楚，能说清楚的还是说清楚。4.2 准备微量样本杯，用来分配校准品和质控品准备上机使用，尽量不要使用子弹头离心管。很多采用离心管的，造成撞针情况的不少。因为校准品和质控品是当做样本，放入样本盘或样本架上的，大部分机型能自动扫描并识别样本类型，是试管还是样本杯，这样就会指导样本针下降高度和判断液面的开始时间。而离心管无法直接放到样本盘架上，只能插入试管上，让试管当托架，这就容易造成误判。机器认为是试管，那么就会按照试管的标准指导样本针下降，并按照试管的液面探测时间开启探测，结果因为离心管的存在，导致行程根本没有那么大，液面探测还没有开启就已经撞针了。严重的会导致样本针弯曲折断，还有的会扎漏离心管，让人惊心动魄。当然，有些机型的某些设计是允许离心管直接放入的，比如东芝的TBA120FR，它的C/C盘就可以直接放置1.5ml的离心管。但要注意，能够直接放置离心管的机型，一定要把盖子去掉，否则盖子回弹，一样会撞针。4.3准备试剂说明书、相应的上机参数：每个试剂盒里都有试剂说明书，里面涵盖了很多内容，包括：名称、规格、用途、成本、有效期及存储条件、适用机型、样本要求及方法。除此之外还有性能指标、注意事项等等，当然还有最为重要的注册证号、标准号、厂家及联系方式。在使用方法里面，会告诉你波长选择、方法及方向，然后是试剂配比的操作方法。要注意的是，这里给出的试剂配比是指手工法的，配比之后上分光光度计读数，然后根据后面给出的公式自行计算的方法，并非上机参数。按照这个配比比例，根据不同机型的反应杯最小和最大反应容量可以自行按照比例计算上机参数的试剂量和样本量。几乎每个试剂厂家都提供不同机型的上机参数，当然也有例外，那就是新出的机型，或占有率较少的机型，厂家还来不及准备。上机参数比较直接，对应机型和项目，直接录入进去就行了。下面举一个例子，厂家就不提供了，只是说明问题：项目名称为TBA，也就是总胆汁酸。厂家的说明书部分截图如下： 前后都有省略，说明问题罢了。由这张说明书上，我们可以看到TBA的方法是速率法，递增（上升）反应。主波长为405nm，副波长为660nm。样本量为20ul，R1量为1350ul，R2量为450ul。不仅有样本的配比，还有标准品的配比，当然二者一样，除此之外还有空白的配比。手工法空白要单独做，用蒸馏水替代样本，测试的是试剂空白。这在很多的机型中自动完成。而在这个厂家的上机参数里，是这样描述的，机型是TBA120FR： 这并不是现在我们看到的TBA120FR的界面，而是老式的，并且没有分页，直接罗列。所以在输入的时候，对应英文选择性输入。首先我们看到手工法和自动法的试剂配比关系，也就是试剂说明书和上机参数之间的关系。说明书的配比关系是：样本量为20ul，R1量为1350ul，R2量为450ul，上机参数的配比关系是样本量为3ul，R1量为200ul，R2量为66ul，几乎就是20:3的关系。所以只要按照比例关系，几乎可以任意设置。那么反应杯的反应总量上下限与试剂配比的关系是什么呢？我们都知道，TBA120FR的反应杯反应总量为80-360ul，低于80ul将无法通过光路，高于360ul会出现漫盘。所以常规选择一般是选择最大反应总量的70%-80%之间，也就是250ul-290ul之间。例子中是