细胞工程植物组织培养介绍.docVIP

第五节 植物组织培养  一、植物组织培养的阶段划分： 通常将组织培养过程划分为四个阶段 1、起始培养阶段 2、增殖培养阶段 3、生根培养阶段 4、驯化移栽。 次氯酸钠  二、外植体起始培养 ★起始培养阶段：无菌体系的诱导 和建立过程。 （一）外植体的起始培养过程 1、 起始培养的一般过程： A、选取适宜的基因型（品种）； B、选取适宜的外植体；茎尖、叶片、叶 柄等。 C、流水冲洗外植体； D、外植体切割、分离及灭菌处理； E、外植体接种于诱导培养基。 F、环境条件控制促进外植体的生长。 2、接种外植体的生长过程： （1）茎尖培养： A 细胞分裂的启动； B 细胞增殖； C 组织和器官的形成。 脱毒苗的培养： ★通过茎尖培养获得无病毒种苗，对退化 品种进行提纯复壮。 ★茎尖培养脱毒主要是由于病毒在植物体 内的分布不均匀，在茎尖部位带病毒少或不 带病毒，因此可以通过茎尖培养脱毒。 ★如草莓、马铃薯、甘薯、苹果、香蕉、 甘蔗等。  HYPERLINK   HYPERLINK   HYPERLINK   （2）愈伤组织培养过程： A 愈伤组织的诱导： 诱导期（启动期）、分裂期  B  愈伤组织的增殖：  C 愈伤组织的分化： 海带幼叶——1幼叶选择 2 外植体固体培养基培养 3 外植体生长 4 液体培养 基培养 5 –6愈伤组织形成 7-8 新植株形成  愈伤组织培养 1）在无菌条件下用镊子或小刀将选择的愈伤 组织块分割成若干小块，剔除附着的原有培 养基，用无菌水清洗几次，然后在无菌条件 下将处理好的愈伤组织小块转移到含有新鲜 分化培养基的培养器皿中； 2）在一定条件下培养4～8周，愈伤组 织就可以分化，长出幼芽和小叶片； 3）当幼苗长到3 cm左右时，在无菌条 件下将幼苗转移到含有生根培养基的培 养器皿中，在一定条件下培养2周左右， 幼苗即可生根。 Callus  high cytokinin lowauxin shoots  lowcytokinin highauxin roots （二）影响外植体起始培养的因素： 1.影响外植体起始培养的因素 A 外植体的遗传基础及生理影响 B 培养基组成成分：矿物盐类、微量有 机成分、碳源、琼脂、活性炭、酚类化合 物、多胺等。 C 植物生长调节物质 D 培养条件：光照、温度、湿度 外植体种类及基因型  2、 愈伤组织培养的影响因素：  A B C  外植体 培养基 培养条件 三、 无菌苗的增殖 1、增殖培养过程： 增殖培养过程是促进无菌苗数 量增加的过程。主要通过芽增殖 的过程进行。 2、影响增殖的因素： （1）细胞分裂素浓度直接影响增 殖的效果，通常使用浓度低于起始 培养阶段。 （2）添加少量的生长素，如NAA 或IAA有利于维持无菌苗适宜的激 素平衡，促进增殖。 （3）增殖阶段要给予外植体适 宜的温度和光照条件，才能保证 其旺盛的增殖过程。 （4）增殖培养阶段要注意及时 转接，否则生长变弱。 3、增殖培养中的常见问题： （1）小型化和无效苗： 激素浓度过高导致无效苗增加。可 以通过降低细胞分裂素浓度克服。 （2）玻璃化现象： 琼脂用量低，相对湿度大，激素浓度 高，温度高等导致玻璃化（植物苗透 明、扭曲、水积状）。 （3）变异问题： 继代次数过多，或由愈伤组织途径形成 的无菌苗，激素条件不适宜等。 （4）污染问题： 转接前未将污染材料分出造成交叉污 染。培养环境无菌程度低。 四、不定根的发生 · Root formation - The shoots are transferred to a growth medium with relatively higher auxin: cytokinin ratios The pottles on these racks are young banana plants and aregrowing roots  (一)生根培养基对不定根形成的 影响 1、矿质营养：  ·  76%的植物可以在MS, 1/2MS, 1/3MS培养基 上正常生根。低盐有利于生根，提高Ca浓度有 促进作用。 2、碳源的影响  ·  多数植物在20~30gL-1蔗糖有利于生根。  无蔗糖生根减少，浓度影响根重。 ·   4.维生素B2 10 umol VB2可以促进木瓜生根，是由于促进了IBA 的光下氧化??用。 5、酚类物质： 1976 发现根皮苷(PZ．phlorlzin)及其水解产生根 皮酚（PG；Phlorglucin01)对苹果无根苗的生长和根 形成有促进的作用。在樱桃和李的组织培养中PG可 提高其苗的生根率和根的数量。 （二）培养条件及其他因素的影响