拮抗灰霉菌的海洋细菌甲基营养型芽胞杆菌的筛选_鉴定及其抑菌活性物质的研究.pdfVIP

33(5)667-674 中国生物防治学报 Chinese Journal of Biological Control 2017 年 10 月 拮抗灰霉菌的海洋细菌甲基营养型芽胞杆菌的筛选、鉴定 及其抑菌活性物质的研究 1 2 2∗ 1∗ 魏新燕 ，黄媛媛 ，黄亚丽 ，杜克久 （1. 河北农业大学林学院，保定 071001 ；2. 河北省科学院生物研究所，石家庄 050051 ） 摘要：采用 ZoBell’s 2216E 培养基从 65 份渤海海水和底泥样品中分离到海洋细菌 464 株，通过平板对峙法 获得了对灰霉菌具有较强拮抗作用的海洋细菌 47 株，其中菌株 BH21 的抑菌作用最强，抑菌带宽度为 （11.8±0.3 ）mm；采用形态学、生理生化和分子生物学相结合的方法，将菌株 BH21 鉴定为甲基营养型 芽胞杆菌 Bacillus methylotrophicus ，该菌具有较强耐盐、耐甲醇能力；通过排油圈法确定菌株BH21 能够 产生具有表面活性的代谢产物，随后以脂肽类物质相关基因的特异序列为引物进行菌株 BH21 抑菌活性成 分相关基因的扩增，确定该菌株中含有 ituA、ituB、ituC、ituD、fenD 、srfAB 和yndJ 等 7 种脂肽物质的合 成基因；利用盐酸沉淀和甲醇抽提法获得了 BH21 发酵液中脂肽粗提物，通过牛津杯法确定该脂肽粗提物 具有明显抑制灰霉菌菌丝生长的能力，抑制率达到 73.9%。 关 键 词：海洋细菌；灰霉菌；甲基营养型芽胞杆菌；脂肽类抗生物质；拮抗菌 中图分类号：S476.1；S435.111 文献标识码：A 文章编号：1005-9261 (2017)05-0667-08 Screening, Identification of Antagonistic Ocean Bacteria Bacillus methylotrophicus and Its Antimicrobial Substances to Botrytis cinerea pres. 1 2 2∗ 1∗ WEI Xinyan , HUANG Yuanyuan , HUANG Yali , DU Kejiu (1. College of Forestry, Hebei Agricultural University, Baoding 071001, China; 2. Institute of Biology, Hebei Academy of Science, Shijiazhuang 050051, China) Abstract: 464 strains of ocean bacteria were isolated from 65 samples of sea water and sediment from Bohai using ZoBell’s 2216E medium. Through plate confrontation method, 47 strains of marine bacteria with strong antagonism against Botrytis cinerea were obtained. Strain BH21 with high salt and methanol tolerance had the strongest antifungal effect and the inhib