两种致病性弧菌外膜蛋白抗原特性的分析.pdfVIP

第26卷第2期 大 连 海 洋 大 学 学 报 Vol.26 No.2 20 1 1 年4 月 JOURNAL OF DALIAN OCEAN UNIVERSITY Apr . 2011 文章编号:2095-1388(2011)02-0184-04 两种致病性弧菌外膜蛋白抗原特性的分析 1 1 1 1、2 2 1 王忠 ,邓灯 , 刘慧 ,程顺峰 ,张晓君 , 王文琪 (1. 青岛农业大学 动物科技学院, 山东 青岛266109;2. 淮海工学院江苏省海洋生物技术重点建设实验室, 江苏 连云港222005) 摘要:采用十二烷基肌氨酸钠 (Sarkosyl) 和苯甲基磺酰氟 (PMSF) 两种方法提取两种海洋致病性弧菌 ———鱼肠道弧菌 Vibrio ichthyoenteri 和秦皇岛弧菌 Vibrio qinhuangdaora sp郾 nov郾 的外膜蛋白, 并应用 SDS- PAGE分析了其外膜蛋白的构成。 电泳图谱显示, 相对分子质量为44000、 36000、 34000、 26000、 23000 的蛋白条带为两种弧菌外膜蛋白中的共有条带。 采用Western- Blotting法比较了两种弧菌外膜蛋白抗原性 的异同, 结果表明, 鱼肠道弧菌外膜蛋白中相对分子质量分别为46000、 43000、 34000、 32000、 28000、 26000 的结构蛋白可同时与两种弧菌抗血清发生反应; 秦皇岛弧菌外膜蛋白中相对分子质量分别为46000、 26000 的结构蛋白可同时与两种弧菌抗血清发生反应。 两种弧菌中均存在相对分子质量为46 000、 26 000 的外膜蛋白, 且具有共同的抗原性。 关键词:鱼肠道弧菌; 秦皇岛弧菌; 外膜蛋白; 抗原性 中图分类号: S941摇 摇 摇 摇 文献标志码: A 摇 摇 鱼肠道弧菌Vibrio ichthyoenteri为革兰氏阴性致 海洋生物技术重点建设实验室提供, 其中秦皇岛弧 病菌, 秦皇岛弧菌Vibrio qinhuangdaora sp郾 nov郾 为 菌是从患败血症的牙鲆上分离的, 经鉴定为弧菌属 新发现的一种革兰氏阴性致病菌。 这两种菌可感染 一个新菌种, 且经中国典型培养物保藏中心 (Chi鄄 大菱鲆Scophthalmus maximus、 牙鲆Paralichthys oli鄄 na Center for Type Culture Collection,CCTCC) 复核 vaceus、 石鲽kareius bicoloratus 等海水养殖经济鱼 鉴定并依据 《细菌命名国际法规》 (ICNB) 分类 [1-5] [1-3] 类, 已对中国水产养殖业造成了一定危害 。 外 定名 。 纯系新西兰大白兔从青岛药检所购得。 膜蛋白(outermembraneprotein,OMP)是革兰氏阴性 弗氏完全佐剂、 不完全佐剂、 十二烷基肌氨酸 细菌细胞壁中所特有的结构, 国内外已对 OMP 免 钠、 苯甲基磺酰氟 (PMSF)、 碱性磷酸酶标记羊 疫原性和免疫保护性进行了大量研究, 结果证实在 抗兔IgG、 氯化硝基四氮唑蓝 (NBT)、 5-溴-4-氯 确定致病性弧菌共同保护性抗原的基础上, 可制备 -3-吲哚-磷酸 (BCIP)、 硝酸纤维素膜 (NC膜) 针对不同种、 不同血清型弧菌的疫苗。 目前, 对多 均购自Sigma公司。 种致病性海洋弧菌的OMP 已有一些研究[4-12] , 但