水稻中cry1ah1基因密码子优化方案的比较.pdfVIP

1184 周宗梁 等/水稻中cry1Ah1 基因密码子优化方案的比较 生 物 工 程 学 报 Chinese Journal of Biotechnology October 25, 2012, 28(10): 1184−1194 /cjbcn ©2012 Chin J Biotech, All rights reserved 农业生物技术 水稻中cry1Ah1 基因密码子优化方案的比较 1,2 3 2 3 2 3 1 2 周宗梁 ，林智敏 ，耿丽丽 ，苏军 ，束长龙 ，王锋 ，朱延明 ，张杰 1 东北农业大学生命科学学院，黑龙江 哈尔滨 150030 2 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室，北京 100193 3 福建省农业科学院农业遗传工程重点实验室，福建 福州 350003 周宗梁, 林智敏, 耿丽丽, 等. 水稻中cry1Ah1 基因密码子优化方案的比较. 生物工程学报, 2012, 28(10): 1184−1194. Zhou ZL, Lin ZM, Geng LL, et al. Comparison of codon optimizations of cry1Ah1 gene in rice. Chin J Biotech, 2012, 28(10): 1184−1194. 摘 要: cry1Ah1 基因是本实验室克隆的具有自主知识产权的模式基因，对鳞翅目害虫水稻二化螟等具有高毒 力，具有较好的应用前景。为提高cry1Ah1 基因在水稻中的表达量，探讨密码子使用频率对基因表达的影响， 依据水稻密码子使用频率设计5 种不同的优化方案，提高GC 含量并去除剪切信号等不稳定因素后合成cry1Ah1 基因杀虫活性区域。优化后的基因在大肠杆菌Rosetta (DE3) 中正常表达了65 kDa 蛋白，表达蛋白对2 龄小菜 蛾和水稻二化螟初孵幼虫都具有良好的杀虫活性。优化的基因转化水稻日本晴后，PCR 阳性率达到87 ％以上， 实时荧光定量RT-PCR 和ELISA 分析表明全部采用最高频率密码子的优化方案效果最好，Cry1Ah 蛋白平均表 达量占可溶性蛋白的0.104 ％。 关键词: cry1Ah1 基因，水稻，密码子优化，实时荧光定量 PCR ，酶联免疫 Comparison of codon optimizations of cry1Ah1 gene in rice 1,2 3 2 3 2 3 Zongliang Zhou , Zhimin Lin , Lili Geng , Jun Su , Changlong Shu , Feng Wang , 1 2 Yanming Zhu , and Jie Zhang 1 College of Life Sciences, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, Heilongjiang, China 2 State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute