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中国科学: 生命科学 2012 年 第42 卷 第1 期: 64 ~ 70
SCIENTIA SINICA Vitae SCIENCE CHINA PRESS
论 文
假定蛋白CT440 在沙眼衣原体感染细胞中的定位
研究
①† ②† ① ① ① ③ ①*
李忠玉 , 黄秋林 , 粟盛梅 , 周洲 , 陈超群 , 钟光明 , 吴移谋
① 南华大学微生物学与免疫学教研室, 衡阳 421001;
② 南华大学附属第一医院, 衡阳 421001;
③ University of Texas Health Science Center at San Antonio, TX 78229, USA
† 同等贡献
* 联系人, E-mail: wym1004@
收稿日期: 2011-10-04; 接受日期: 2011-11-15
国家自然科学基金(批准号: 、湖南省自然科学基金(批准号: 09JJ3059)和湖南省高校科技创新团队(批准号: 湘教通
[2010] 212 号)项目资助
摘要 包涵体膜蛋白在沙眼衣原体致病过程中发挥重要的作用. 为确定假定蛋白CT440 在 关键词
沙眼衣原体感染细胞中的定位及特征, 本研究采用PCR 方法从D 型沙眼衣原体的基因组中扩 沙眼衣原体
CT440
增Ct440 基因, 克隆入pGEX-6p 原核表达载体构建pGEX-6p/Ct440 原核表达重组体, 重组体
包涵体膜蛋白
转化到XL1-blue 大肠杆菌, IPTG 诱导表达融合蛋白GST-CT440. 纯化后的CT440 融合蛋白
免疫小鼠制备抗体, 间接免疫荧光(IFA)和Western blot 测定抗体的特异性. 特异性抗体用于
分析CT440 蛋白在衣原体感染细胞内的定位、表达时相特征及其对衣原体感染的影响. 结果
表明, CT440 蛋白定位于沙眼衣原体包涵体膜上, 为沙眼衣原体包涵体膜蛋白; 该蛋白在衣
原体感染12 h 后开始表达, 直至持续到整个感染周期; 转基因在胞浆表达的CT440 融合蛋白
不影响其后的衣原体感染. 本实验为深入研究衣原体与宿主细胞间的相互作用, 阐明衣原体
致病机制提供了重要的实验依据.
沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis, Ct)是一种严 致病机制、研制有效疫苗, 是预防、控制 Ct 疾病的
格细胞内寄生的原核细胞型微生物, 是世界范围内 关键.
感染性致盲的首位病因[1], 也是发达国家性传播疾病 Ct 具有独特的双相性发育周期[8,9], 存在原体
最常见的病原体. Ct 感染不仅可引起盆腔炎、异位妊 (elementary body, EB)和网状体(reticulate body, RB)
娠、不孕症等多种疾病[2,3]; 同时还可增加HIV 感染 两种不同状态. EB 首先通过肝硫素吸附于易感细胞
率及宫颈癌的发病率[4~7]. 由于Ct 感染患者通常表现 表面而进入细胞内形成包涵体, 在包涵体内生长发
为无症状或轻微症状, 因此在临床上该疾病往往不 育成RB, RB 以二分裂形式繁殖, 形成众多的子代EB,
易被发现, 因而得不到及时的治疗, 致使感染反复迁
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