表达两种不同外膜蛋白的禽大肠杆菌融合菌株的构建ξ-西北农林科技.pdfVIP

( ) 第 3 1 卷　第 5 期 西北农林科技大学学报 自然科学版 . 3 1 . 5 V o l N o 2003 年 10 月 . . . . ( . . . ) . 2003 Jou r o f N o r thw e st Sci T ech U n iv o f A gr i an d Fo r N at Sci E d O ct 表达两种不同外膜蛋白的禽大肠 杆菌融合菌株的构建 张彦明, 鱼艳荣, 王晶钰 ( 西北农林科技大学 动物科技学院, 陕西 杨陵 7 12 100) 　　[摘　要]　对从陕西省主要养鸡地区病死鸡及鸡胚中分离的致病性禽源大肠杆菌, 用 进行 SD S PA GE Om p 分型。采用不同浓度溶菌酶作用不同时间裂解细胞壁, 制备原生质体, 在高渗平板上再生培养; 在药敏试验的基础 上, 结合Om p 型分析, 选择具有交叉耐药且Om p 型不同的菌株, 利用 PE G 诱导进行原生质体融合, 在含双抗的高 渗平板上筛选融合株, 对不同代次的融合株分别进行革兰氏染色镜检、生化鉴定、血清型鉴定和Om p 型分析。结果 表明, 所构建的融合菌株染色镜检和生化特性均符合大肠杆菌特征, 75% 融合子可凝集 2 亲本的O 抗原, 25% 凝集 其中 1 个亲本的O 抗原; 外膜蛋白型表现为 1 个或 2 个亲本的带型, 但都有不同程度的增强。经稳定性检验证明其 为遗传学上稳定的融合子。 [ 关键词]　禽大肠杆菌; 外膜蛋白型; 原生质体融合; 融合菌株 [ 中图分类号]　 858. 3 12. 5+ 2　　　　[ 文献标识码]　 [ 文章编号]　167 19387 (2003) 050 12305 S A 　　随着我国养禽业的快速发展, 禽大肠杆菌病的 [ 1 ] 具有很大的潜力 。本研究对陕西省主要致病性禽 流行日益严重, 给养禽业造成了很大的经济损失, 同 源大肠杆菌进行Om p 提取分型, 采用原生质体融 时, 染有大肠杆菌(E. coli) 的禽肉和禽蛋也对消费 合技术, 将表达不同外膜蛋白的菌株进行融合, 构建 者的健康构成较大的威胁, 因此, 有效防制禽大肠杆 出能表达 2 种以上Om p 的融合株, 为研制禽大肠杆 菌病具有重要的公共卫生学意义。近十几年来, 菌苗 菌融合菌株疫苗奠定基础。 免疫已成为控制禽大肠杆菌病的重要手段。现行大 1　材料与方法 肠杆菌灭活苗建立在血清学分型的基础上, 研制出 的单价苗仅对同型致病菌有保护力, 多价混合苗效 1. 1　材　料 果虽较好, 却在抗原含量与保护力上难以两全。目前 1. 1. 1　菌　株