鳖嗜水气单胞菌疫苗的试制-上海海洋大学学报.pdfVIP

第7卷第1期 上海水产大学学报 Vol. 7. No. 1 1998年3月 JOURNAL OF SHANGHAI FISHERIES UNIVERSITY March. 1998 鳖嗜水气单胞菌疫苗的试制 THE PREPARATION OF AEROMONAS HYDROPHILA V ACCINE TO SOFT SHELLED TURTLE 孙玉华 SUN Yu-Hua (上海水产大学渔业 学院. 200090) CCollege 0/ Fisheries. SFU. 200090) 关键词 鳖，嗜水气单胞菌，疫苗 KEYWORDS soft shelled turtle. Aeromonas hydro户hila. vaccine 中图分类号 5947.1 嗜水气单胞菌能引起人和动物的疾病。 我国的许多谈水鱼类的暴发病病原是嗜水气单胞 菌[孙其焕等1991，陈怀 青和陆承平1991J。暴发病的流行造成巨大的经济损失，严重影响了 等1996 我国植业的发展。 近年来各种名特水产品的养殖也正在受这种细菌的危害〔孙佩芳 ，陆 宏达和金丽华1996J。 一昧地应用抗生素及化学药物将会带来很多不良后果，且效果不很明 显。 因此开发一种有效的疫苗势在必行。 国外商品性鱼用疫苗在七十年代中已开始生产，国内 也在研究试制[杨先乐等1989， 许淑英等1994，孙建和和陆承平1995J。 本实验室人员从患穿 孔病的鳖上分离到一嗜水气单胞菌强毒菌株Ah-9551。 鳖一旦得了穿孔病，轻者身上出现很 多孔洞，重者大量死亡，损失严重。 用此菌株制备疫苗，如在生产实践中能通过有效的免疫途 径，将会对鳖病的预防带来一定好处。 1 材料与方法 1.1 试验用菌种及动物 试验用菌种经鉴定为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)9551菌株，简称 Ah 9551。 小 鼠每只重约25g，购自上海贵宝实验动物中心。 鳖每个重约30g，购自上海郊区某养鳖厂。 玻璃 缸中驯养一周后进行试验，循环水，300C水植，定时技放饵料及清除排泄物。 1997一09-22收到 76 上 海 水 产 大 学 学报 7卷 1.2 疫苗的制备 选择健康活鳖做Ah-9551菌株的复壮，将发病刚死的鳖立即解剖，用其肝脏做平板划 线，28C培养18h，挑取单菌落再通过纯化，斜面接种培养备用。 将复壮过的Ah-9551菌株接 种肉汤蛋 白陈液体培养基，摇床培养110rpm，28C ， 26h，计 数后全部培养物用0.2%的甲醒 3TC灭活72h[陈月英等1996J，再加1%的亚晒酸纳维生素E注射液为免疫增强剂，制得全菌 疫苗。 用常规方法进行无菌检测，同时用两倍于使用浓度的全菌苗腹腔注射，检测疫苗的安全 性。 疫苗4C保存。 1.3 小鼠的免疫保护试验 将20只小鼠分四组，按内 插法计算LDso[邱郁春1992J。另将12只小鼠随机分成两组:全菌 疫苗免疫组和生理盐水对照组。 初次免疫两周后加强免疫，加强后四周用50LDso的Ah-9551 菌株攻击，观察三天，记录发病死亡情况。 小鼠抗体动态检测按照[兰州生物制品研究所1980J 微量凝集法。 免疫剂量为109个菌/只，生理盐水0.2mL。 1.4 鳖的免疫保护试验 将28只鳖随意挑14只作对照，每只注射0.2mL无菌生理盐水，其余作肌肉注射全菌疫苗， 剂量为109个菌/只。 初次免疫后两周强化免疫，免疫剂量与途径与初次免疫相同，强化后四周 腹腔注射Ah-9551菌株攻击。 每次随机抽取3只鳖断颈取血，用微量血凝法测抗体效价。 2 结果 2. 1 疫苗的制备