普通肝素改善高迁移率族蛋白1介导的血管内皮细胞屏障通透性增加的.pdfVIP

中国呼吸与危重监护杂志 2017年1月第16卷第1期 • 29 • ·论 著· 普通肝素改善高迁移率族蛋白 1 介导的血管 内皮细胞屏障通透性增加的实验研究 胡博，栾正刚 中国医科大学附属第一医院重症医学科（沈阳  110001 ） 【摘要】   目的    观察普通肝素（UFH ）对高迁移率族蛋白 1 （HMGB 1 ）介导的人脐静脉内皮细胞屏障通透 性损伤的保护作用，探讨 UFH 对 HMGB 1 介导的胞质紧密粘连蛋白 -1 （ZO-1 ）表达缺失的保护机制。方法    将 人脐静脉内皮细胞进行体外培养，人脐静脉内皮细胞株传代培养后分为 4 组（ n = 5 ）：空白对照组（加入等量 PBS ）、HMGB 1 处理组（100 ng/ml）、UFH 对照组（UFH 10 U/ml ）、HMGB 1 及 UFH 处理组（100 ng/ml HMGB 1 + UFH 10 U/ml ）。MTT 法测定内皮细胞存活率，用 Transwell 小室法测定单层内皮屏障通透性，用免疫荧光染 色法测定 ZO-1 的表达分布，蛋白免疫印迹（Western blot ）法检测 ZO-1 蛋白及核因子 -κB （NF-κB ）的表达。 结果    HMGB 1 （100 ng/ml）对内皮细胞活性无抑制作用（P ＞0.05 ）。UFH 预处理后可减少 HMGB1 所致的内皮细 胞通透性增加（P ＜0.05 ）。UFH 预处理后可降低 HMGB 1 所致内皮细胞 ZO-1 密闭环的减少和破坏，使 ZO-1 荧光强度增强，ZO-1 蛋白表达增加，并使 NF-κB 的核易位减少。结论    UFH可保护 HMGB 1 介导的内皮细胞 ZO-1 的表达缺失，进而改善内皮细胞屏障通透性，其机制与减少 NF-κB 核易位相关。 【关键词】  脓毒症；高迁移率族蛋白 1 ；普通肝素；胞质紧密粘连蛋白 -1 ；核因子 -κB Protective Effects of Unfractionated Heparin on HMGB1-Induced Increased Permeability of Endothelial Cells HU Bo, LUAN Zhenggang Intensive Care Unit, The First Hospital of China Medical University, Shenyang, Liaoning 110001, P.R.China Corresponding author: LUAN Zhenggang, Email: zgl17698@ 【Abstract 】 Objective    To observe the protective effects of unfractionated heparin (UFH) on high-mobility group box-1 protein (HMGB1) induced increased permeability of endothelial cells, and investigate the protective mechanism of UFH on HMGB1 induced defective expression of zonula occludens-1 (ZO-1). Methods    Human umbilical vascular endothelial cells (HUVECs) were cultured in vitro and divided into 4 groups (n=5), namely a control group, a HMGB1 group (100 ng/ml), a heparin group (UFH 10 U/ml), a HMGB1/heparin group (100 ng/ml HMGB1 + UFH 10 U/ml). Endothelial cell viability was measured by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) colorimetr