原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
742 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 14, 49 (5): 742 746
酒酵母羊毛甾醇合酶基因单倍体缺陷型突变株的构建
* *
高丽丽, 王庆华, 梁会超, 巩 婷, 杨金玲, 朱 平
( 中国医学科学院、北京协和医学院药物研究所, 天然药物活性物质与功能国家重点实验室
卫生部天然药物生物合成重点实验室, 北京 100050)
摘要: 羊毛甾醇合酶基因 (lanosterol synthase gene, erg7) 编码的羊毛甾醇合酶是酿酒酵母 (Saccharomyces
cerevisiae) 甾醇生物合成途径中重要的限速酶。酿酒酵母固有的甲羟戊酸 (MVA)/麦角甾醇代谢途径的中间体
2, 3-氧化鲨烯也是三萜类化合物的合成前体。因此, 羊毛甾醇合酶催化的2, 3-氧化鲨烯环化是麦角甾醇和三萜类
化合物生物合成分支形成的关键位点。下调 2, 3-氧化鲨烯流向麦角甾醇的代谢, 可为应用合成生物学 术在酿
酒酵母中组建三萜类化合物的代谢途径奠定基础。本研究通过设计含有与erg7 基因ORF 序列两侧同源的长引物,
以质粒 PUG66 为模板进行 PCR, 构建带有 loxP-Marker-loxP 的 erg7 基因敲除组件, 采用 LiAc/SS Carrier
DNA/PEG 方法转化双倍体野生型酿酒酵母INVSc1, 通过同源重组的方式构建酿酒酵母erg7 基因单倍体缺陷型
突变株。半定量PCR 和实时定量PCR 结果表明, 突变株内erg7 基因表达水平下降约1 倍。TLC 和HPLC 结果
表明, 突变株内麦角甾醇含量下降至野生型菌株的42% 。
关键词: 酿酒酵母; erg7 基因; 基因敲除; 同源重组; 麦角甾醇
中图分类号: R93 1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 14) 05-0742-05
Construction of Saccharomyces cerevisiae haploid mutant
deficient in lanosterol synthase gene
* *
GAO Li-li, WANG Qing-hua, LIANG Hui-chao, GONG Ting, YANG Jin-ling , ZHU Ping
(State Key Laboratory of Bioactive Substance and Function of Natural Medicines and Key Laboratory of Biosynthesis of
Natural Products, Ministry of H ealth of PR C, Institute of Materia Medica, Chinese A cademy of M edical Sciences and
Peking Union Medical
文档评论（0）