长效重组人胰岛素原类似物的高密度细胞培养的研究-中国医学前沿杂志.pdfVIP

中国抗生素杂志 2009年 12 月第 34卷第 12 期 ·7 17 · 遗传育种与生物合成 文章编号 : 100 18689 (2009) 1207 1705 长效重组人胰岛素原类似物的高密度细胞培养的研究 何勇智 　高强 　杜天飞 　王明蓉 (中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所 , 　成都 6 10052) ( ) 　　摘要 : 　本文以长效重组人胰岛素原类似物 SIIA 0801 的大肠埃希菌工程菌为研究对象 ,针对采用高细胞密度培养技术表达 ( ) 包涵体重组融合蛋白的关键参数 ,重点研究了诱导培养基成份 包括碳源 、氮源 、无机盐 、微量元素 、种子细胞密度 、IPTG诱导剂的 加入量及诱导时间 ,诱导温度等因素与包涵体表达产量的相关性 。结果发现其融合蛋白的最佳表达培养基 : 1. 5%蛋白胨 , 1%酵母 ( ) 粉 , 0. 5%N aCl, 0. 8%葡萄糖和 0. 2 %磷酸盐缓冲液 22mmol/L KH PO , 40mmol/L K HPO 。最佳诱导表达条件为 : 25%接种量 ,诱 2 4 2 4 导温度 37 ℃,接种培养 1h后添加 0. 5mmol/L IPTG,继续诱导培养 5h,发酵培养的总周期为 6h。优化后的培养条件比传统的 LB 培 ( ) 养基及培养方法 ,其产量提高了 6倍多 。该结果为长效重组人胰岛素原类似物 SIIA 0801 后续的生产工艺研究提供了重要的参考 依据 。 ( ) 　　关键词 : 　长效重组人胰岛素原类似物 SIIA 080 1 ; 　高细胞密度发酵 ; 　包涵体 　　中图分类号 : Q78　　文献标识码 : A Stud ies on h igh den sity culture cond ition for hum an in sulin ana logues production in recom b inan t E sch er ich ia co li H e Yongzh i, 　Gao Q iang, 　Du Tianfei　and　W ang M ingrong ( Sichuan Indu strial In stitu te of A ntib iotic s, Ch ina Pharm aceutical Group , 　Chengdu 6 10052) 　　A BSTRAC T　A n recomb inan