降糖三黄片对糖尿病大鼠肾脏的保护作用-hkrcmp.docVIP

降糖三黃片對糖尿病大鼠腎臟的保護作用 陳雲１指導：李賽美２ （1, 香港注冊中醫師，廣州中醫藥大學醫學博士；2, 廣州中醫藥大學傷寒教研室主任） 基金項目：廣東省科技廳攻關項目（編號：2008B060600073） 【摘要】【目的】觀察中藥降糖三黃片對糖尿病大鼠腎臟的保護作用。【方法】SPF級Wistar大鼠，隨機分為正常組、模型組、中藥組和西藥組，採用高脂飼料加少量STZ腹腔注射複製2型糖尿病大鼠模型，造模成功後進行8周給藥，中藥組以降糖三黃片（劑量按787.5mg.kg-1.d-1），西藥組以開博通（劑量按4mg.kg-1.d-1）。實驗末腹主動脈採血檢測各組血糖、血脂、胆固醇、胰島素、血肌酐和尿素氮水準；測24h尿蛋白定量；摘取左側腎臟稱重並計算腎重指數。【結果】中藥組血糖、血脂、胰島素水準下降，胰島素敏感指數上升，與模型組和開博通組比較差異有顯著性意義（P0.01或P0.05）；中藥組腎重指數明顯低於與模型組差異具統計學意義（P0.05）；蛋白尿也明顯低於模型組（P0.01）。【結論】降糖三黃片可通過改善糖尿病大鼠血糖、血脂和胰島素抵抗，減少蛋白尿的排泄，減輕腎臟的肥大，達到保護腎功能延緩DN發展的目的。 【關鍵詞】降糖三黃片糖尿病腎病瀉熱逐瘀 益氣養陰法 糖尿病腎病是糖尿病主要的慢性併發症之一，也是嚴重威脅和影響DM患者生存和生活品質的慢性微血管併發症，是DM患者主要的死亡原因。西醫在治療DN上主要以控制高血糖、控制血壓等對症治療，但迄今尚沒有一個能完全阻斷DN進展的有效藥物。中醫藥治療糖尿病腎病在症狀的改善具有明顯的優勢。前期研究表明，運用加味桃核承氣湯治療糖尿病微血管病變已經取得良好的療效，本研究根據中醫理論，結合糖尿病腎病的臨床特徵、發病機制及其病理特點，應用加味桃核承氣湯（降糖三黃片）對模型進行干預，觀察糖尿病大鼠一般情況、24小時尿蛋白定量、血糖、血脂、腎功能、腎重/體重比，研究瀉熱逐瘀，益氣養陰中藥對DM大鼠腎臟的保護作用，為其臨床應用及進一步的機理探討提供實驗依據。 1 材料及方法 1.1 主要藥品、試劑及儀器降糖三黃片為廣州中醫藥大學院內製劑（批號：粵；鏈脲佐菌素（STZ）由Sigma公司生產；卡托普利片（商品名：開博通），中美上海施貴寶製藥有限公司生產（批號：0906032）；TGF-βl酶聯免疫試劑盒，博士德生物技術有限公司生產；生物組織全自動脫水機、包埋機及冷凍機、全自動染色機，為湖北孝感醫用儀器有限公司產品；HMIAS-2000高清晰度彩色醫學圖文分析系統為武漢千屏影像技術有限責任公司產品；病理圖像分析系統為日本奧林巴斯產品。　 1.2 動物模型建立SPF級Wistar大鼠，體重50~70g（廣東省實驗動物檢測所，合格證：001號，環境設施合格證：028號）；所有大鼠普通飼料（總熱量6.94J/g，其中蛋白質23%，碳水化合物53%，脂肪5%購自廣東省實驗動物中心）適應性餵養2W後，隨機分為2組，造模組改用高脂飼料（總熱量4.9kcal/g，其中蛋白質20%，碳水化合物35%，脂肪45%，蛋氨酸按1%比例添加，購自廣東省實驗動物中心）餵養一個月。造模前禁食12h，造模組按30mg/kg劑量腹腔內注射STZ，正常組腹腔內注射等量檸檬酸緩衝液。1W後，測定空腹血糖（Fasting blood glucose，FBG）和空腹胰島素（Fasting insulin，FINS），計算胰島素敏感指數〔Insulin sensitive index，ISI，ISI=In（FINS×FBG）-1〕。連續兩次空腹血糖≥11.1mmol/L，查尿糖++以上，胰島素敏感指數降低，且出現多飲、多尿、多食現象，確認為2型糖尿病模型。模型建立後，繼續予以高脂飼料餵養8W，分別於4、8周用代謝籠收集24小時尿液，測24h尿蛋白定量。24h尿蛋白定量≥20mg判定為DN大鼠造模成功。 1.3 分組及給藥Wistar大鼠隨機分為正常組（n=10）與造模組（n=34）。造模成功的大鼠進一步隨機分為模型組（n=10）、中藥組（n=12）、西藥組（n=12）。中藥組予以降糖三黃片按787.5mg.kg-1.d-1的劑量給藥，西藥組予以開博通按4mg.kg-1.d-1的劑量給藥，正常組及模型組灌服等量蒸餾水。觀察期為8周。 1.4 觀察指標與方法 1）血、尿生化指標檢測：造模一周後，大鼠禁食12h，空腹眼眶靜脈竇採血，糖尿病大鼠造模成功後8周，處死前腹主動脈採血檢測FBG、胆固醇、甘油三酯、胰島素、尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）。於造模成功後4、8周，分別用代謝籠收集24小時尿液。用考馬斯亮藍法檢測尿蛋白總量。 2）腎臟重量係數：於8周未禁食不禁水12h，股動脈取血處死動物。摘取腎臟，觀察兩腎大體外觀，右腎去包