重组人白细胞介素-1α在毕赤酵母中的表达纯化及-生物技术通报.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2015, 31 9 :244-250 重组人白细胞介素 -1α 在毕赤酵母中的表达、纯化及 生物学活性检测 李斌  许晓亚  杨刚刚  崔晴晴  杨亚娟  徐存拴 （河南师范大学生命科学学院 河南省一科技部共建细胞分化国家重点实验室培育基地和河南省生物工程重点实验室，新乡 453007） 摘 要 ： 在毕赤酵母中分泌表达重组人白细胞介素-1α （rhIL-1α），优化rhIL-1α的发酵工艺及纯化方法，以获得高表达、高 纯度具有生物学活性的rhIL-1α。通过PCR 扩增获得hIL-1α基因，构建其真核表达载体pPICZαA/hIL-1α，电转化至毕赤酵母X-33， 用PCR 和SDS方法筛选高效表达rhIL-1α的工程菌株并进行Western blot 鉴定，DEAE 弱阴离子离子交换层析一步纯化表达 产物，并用MTT 法初步检测其对人肝癌细胞7402 的生物学作用。rhIL-1α在摇瓶规模下，经甲醇诱导4 d 后表达量约为30 mg/L。 Western blot 检测rhIL-1α的特异性结合，获得纯度约95%，收率40% 左右的rhIL-1α，并证明rhIL-1α能够抑制人肝癌细胞7402 的 增殖。构建了重组hIL-1α的基因工程菌，并在毕赤酵母中实现了高效表达，为进一步研究其生物学活性和功能奠定了基础。 关键词 ： 重组人白细胞介素-1α ；毕赤酵母 ；表达 ；纯化；人肝癌细胞 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2015.09.035 ， Expression Purification and Bioactivity of Recombinant Human - α Interleukin 1 Expressed in Pichia pastoris Li Bin Xu Xiaoya Yang Ganggang Cui Qingqing Yang Yajuan Xu Cunshuan （State Key Laboratory Cultivation Base for Cell Differentiation Regulation and Henan Bioengineering Key Laboratory ，Henan Normal University，College of Life Science ，Henan Normal University ，Xinxiang 453007 ） : This work is to secret and express human interleukin- 1α （rhIL-1α）in and optimize the fermentation and Abstract Pichia pastoris purification process of rhIL- 1α for obtaining the rhIL- 1α with high-purity, high-expression and owing biological activity. The gene - α