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山羊SKIP基因重组腺病毒载体构建 　　摘要：试验利用Gateway技术构建含山羊SKIP基因的重组腺病毒载体。首先采用PCR扩增山羊SKIP基因连接入pcDNA3.1（+），将酶切回收的SKIP产物片段克隆至腺病毒穿梭载体pYr-adshuttle-2 获得重组质粒pYr-adshuttle-2-SKIP。从该重组质粒上，利用LR同源重组将SKIP-EGPF表达框转移至腺病毒骨架质粒pAd/PL-DEST，获得重组腺病毒质粒pAd-SKIP。该质粒经pacI 线性化后转染HEK293A细胞包装病毒，获得重组腺病毒rAd-SKIP。重组腺病毒分别经酶切和PCR 等方法进行鉴定。荧光显微镜观察转染效果。结果证实腺病毒载体中含有SKIP基因的目的片段，荧光显微镜发现该重组腺病毒能在C2C12细胞中高效表达。表明成功构建了同时表达SKIP蛋白和绿色荧光蛋白的重组腺病毒，为下一步开展关于SKIP基因的功能研究奠定了基础。 关键词：重组腺病毒；山羊SKIP基因；基因过表达；感染细胞 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）21-5258-04 Construction of A Recombinant Adenovirus Vector pAd-SKIP XIONG Qi，ZHANG Nian，SUO Xiao-jun，LI Xia