不同剂量健腰密骨片对骨形成和小鼠骨髓间充质-上海中医药杂志.PDF

·７２· 上海中医药杂志 ２０１６年第５０卷第７期 ＳＨ．Ｊ．ＴＣＭＪｕｌ．，２０１６；Ｖｏｌ．５０Ｎｏ．７ 实验研究 ＤＯＩ：１０．１６３０５／ｊ．１００７１３３４．２０１６．０７．０２３ 不同剂量健腰密骨片对骨形成和小鼠骨髓间充质 干细胞中ＢＭＰ７表达的影响 唐德志，杨　洲，笪巍伟，赵永见，姚长风，施　杞，王拥军 上海中医药大学附属龙华医院，上海中医药大学脊柱病研究所（上海　２０００３２） 【摘要】　目的　探讨不同剂量健腰密骨片对小鼠椎体和骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌ，ＢＭＳＣｓ）成骨分化过 程中骨形态发生蛋白７（ｂｏｎｅｍｏｒｐｈｏｇｅｎｉｃｐｒｏｔｅｉｎ７，ＢＭＰ７）表达的影响。方法　选取 １月龄昆明小鼠４８只，雌雄各半，按体质量随 机分为健腰密骨片高、中、低剂量组及生理盐水４组，灌胃８周后取材。用ＭｉｃｒｏＣＴ扫描分析Ｌ４腰椎，免疫组化染色观察不同剂量健 腰密骨片对椎体ＢＭＰ７表达的影响；分离培养获得各组小鼠原代骨髓间充质干细胞（ＢＭＳＣｓ），利用碱性磷酸酶（ＡＬＰ）染色、实时荧 光定量ＲＴＰＣＲ法检测ＢＭＳＣｓ成骨分化过程中ＢＭＰ７的表达情况。结果　与生理盐水组比较，健腰密骨片高剂量组能够改善小鼠 椎体三维结构，促进椎体ＢＭＰ７蛋白的表达；健腰密骨片高剂量组能够明显增加ＢＭＳＣｓ中ＡＬＰ活性，上调成骨基因ＢＭＰ７ｍＲＮＡ的 表达量（Ｐ＜０．０５）。结论　健腰密骨片高剂量组能够明显提高小鼠椎体骨量，促进ＢＭＳＣｓ成骨分化，上调椎体和ＢＭＳＣｓ成骨分化过 程中ＢＭＰ７表达，从而促进骨形成。 【关键词】　健腰密骨片；骨髓间充质干细胞；骨形态发生蛋白７；骨形成；中医药疗法 ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅＪｉａｎＹａｏＭｉＧｕｔａｂｌｅｔｏｎｍｉｃｅｂｏｎｅｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄＢＭＰ７Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆ ｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ ＴＡＮＧＤｅｚｈｉ，ＹＡＮＧＺｈｏｕ，ＤＡＷｅｉｗｅｉ，ＺＨＡＯＹｏｎｇｊｉａｎ，ＹＡＯＣｈａｎｇｆｅｎｇ，ＳＨＩＱｉ，ＷＡＮＧＹｏｎｇｊｕｎ ＬｏｎｇｈｕａＨｏｓｐｉｔａｌ，ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄｔｏＳｈａｎｇｈａｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｇｈａｉ，２０００３２ Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｓｏｆＪｉａｎＹａｏＭｉＧｕｔａｂｌｅｔｏｎｍｉｃｅｂｏｎｅｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄＢＭＰ７ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｍｅｓｅｍｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍｃｅｌｌｓ（ＢＭＳＣｓ）ｉｎｍｉｃｅｄｕｒｉｎｇｔｈｅｏｓｔｅｏｇｅｎｅｔｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　 Ｓｉｘｔｙ１ｍｏｎｔｈｏｌｄＫｕｎｍｉｎｇｍｉｃｅ，ｍａｌｅｔｈｉｒｔｙａｎｄｆｅｍａｌｅｔｈｉｒｔｙ，ｗｅｒｅ ｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｆｏｕｒｇｒｏｕｐｓｏｆｈｉｇｈｄｏｓｅ，ｍｉｄｄｌｅｄｏｓｅ，ｌｏｗｄｏｓｅ，ａｎｄｓａｌｉｎｅｇｒｏｕｐ．Ａｌｌｔｈｅｍｉｃｅｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃａｌｌｙａｎｄｓａｃｒｉｆｉｃｅｄａｆｔｅｒ８ｗｅｅｋｓ． Ｔｈｅｆｏｕｒｔｈｌｕｍｂａｒｖｅｒｔｅｂｒａ（Ｌ４）ｗａｓｓｃａｎｎｅｄｂｙＭｉｃｒｏＣＴ，ＴｈｅＢＭＰ７ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｅａｃｈｇｒｏｕｐｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｕｓｉｎｇｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓｔａｉｎｉｎｇ．Ｐｒｉｍａｒｙｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ（ＢＭＳＣｓ）ｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｅａｃｈｇｒｏｕｐ．Ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＡＬＰ）ｓｔａｉｎｉｎｇｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅ ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ，ａｎｄｒｅａｌｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅＰＣＲａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＢＭＰ７．Ｒｅｓｕｌｔｓ　 Ｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｎｏｒｍａｌｓａｌｉｎｅ ｇｒｏｕｐ，ｈｉｇｈｄｏｓｅｇｒｏｕｐｉｍｐｒｏｖｅｄｍｉｃｅｖｅｒｔｅｂｒａｌｔｈｒｅｅｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＡＬＰ，ｐｒｏｍｏｔ