不同表达条件对犈犻犿豺狉犻犪狋豺状豺犾犾犪-畜牧兽医学报.pdfVIP

畜牧兽医学报 ， （）： ２０１０４１９ １１５８１１６５ 　 犃犮狋犪犞犲狋犲狉犻狀犪狉犻犪犲狋犣狅狅狋犲犮犺狀犻犮犪犛犻狀犻犮犪 不同表达条件对犈犻犿犲狉犻犪狋犲狀犲犾犾犪丙二酰单酰 辅酶 ： 转移酶活性的影响 犃犃犆犘 孙铭飞，覃宗华，谢明权，袁建丰，吕敏娜，余劲术，吴彩艳，蔡建平 （广东省农业科学院兽医研究所 广东省兽医公共卫生公共实验室，广州 ５１０６４０） 摘 要：为探讨不同原核表达载体、不同表达温度对重组表达 丙二酸单酰辅酶 ： 转移酶活 犈犻犿犲狉犻犪狋犲狀犲犾犾犪 Ａ ＡＣＰ 　 性的影响，以生物信息学技术预测的 型脂肪酸合成代谢途径中的丙二酰单酰辅酶 ： 转移酶（ 犈．狋犲狀犲犾犾犪Ⅱ Ａ ＡＣＰ Ｅｔ ＭＣＡＴ）编码序列为基础，分别设计引物扩增完整 ＯＲＦ，采取截除信号肽而保留转导肽以及切除信号肽和转导肽的 不同策略，选择 、 （ ）和 种不同表达载体分别构建重组表达质粒，转化大肠杆菌 ＭＡＬｃ２ｘ ＥＴ３２ａ＋ ＰｒｏＥｘＨＴａ３ ｐ ｐ ｐ （ ）后，在不同条件下诱导表达，利用酮戊二酸脱氢酶（ ）偶联系统测定表达产物的酶活性，以评价不 ＲｏｓｓｅｔａＤＥ３ ＫＤＨ 同表达策略对表达效果和表达产物活性的影响。表达水平和酶活性分析结果显示，惟切除信号肽和转导肽后的功 能蛋白编码区能表达， （ ）／ 体系的可溶性表达量高于 （ ）／ （ ） ＲｏｓｓｅｔａＤＥ３ ＭＡＬｃ２ｘ犿犮犪狋 ＲｏｓｓｅｔａＤＥ３ ＥＴ３２ａ＋  ｐ ｐ ，但二者表达产物的酶活性相似，且均随着诱导温度的降低其可溶性蛋白表达量增加。但 （ ）／ 犿犮犪狋 ＲｏｓｓｅｔａＤＥ３ ｐＰｒｏＥｘＨＴａ犿犮犪狋体系仅能表达不溶性蛋白，且复性后无酶活性，改变诱导温度对表达效果无明显影响。结果表明 不同表达载体和诱导温度对大肠杆菌所表达 ＥｔＭＣＡＴ的活性及其表达形式有显著影响，其中融合标签和表达温 度可能是主要的影响因素，包涵体表达的重组酶即使复性处理仍难达到酶活性分析的要求。 关键词：柔嫩艾美耳球虫；丙二酰单酰辅酶 ： 转移酶；表达载体；酶活性 Ａ ＡＣＰ 中图分类号： ； 文献标识码： 文章编号： （ ） Ｓ８５２．７２３ Ｑ７８６ Ａ ０３６６６９６４２０１００９１１５８０８ 　　　　 　　　　 犈犳犳犲犮狋狊狅犳犇犻犳犳犲狉犲狀狋犈狓狉犲狊狊犻狅狀犞犲犮狋狅狉狊犪狀犱犜犲犿 犲狉犪狋狌狉犲狊狅狀狋犺犲犃犮狋犻狏犻狋 狆 狆 狔 ： 狅犳犈犻犿犲狉犻犪狋犲狀犲犾犾犪犕犪犾狅狀犾犆狅犃犃犆犘犜狉犪狀狊犪犮犾犪狊犲